基因工程制药-复习课件.ppt

简 答 题 （1）如何克隆微生物的纤溶酶基因？ （2）获得目的基因的途径有哪些？ （3）限制性内切酶的特点（掌握如何从给出的序列中寻找酶切位点）。 （4）PCR的类型及其应用（举例介绍）。 （5）电泳上样缓冲液的作用有哪些？ 名词解释 杂交； 探针； 粘粒； 同尾酶（同裂酶）; cDNA文库； 基因工程药物； 盐析； 星活性; 什么是基因工程？ 教 学 内 容 I 基因工程制药概论(2学时） II 基因工程制药原理及技术（25学时） 1) 基因工程概论（2学时） 2) 基因工程的基本技术（6学时） 3) 基因工程的工具酶和载体（6学时） 4) 目的基因的获取方法（4学时） 5) 目的基因的表达系统（3学时） 6) 基因工程菌株的发酵（2学时） 7) 药物蛋白的分离纯化与质量控制（2学时） III 基因工程药物实例介绍（3学时） IV 练习与复习（2学时） 2、种 类： 激素类及神经递质类药物 细胞因子类药物 酶类药物与凝血因子 基因工程疫苗 c) 酶类药物与凝血因子 酶类药物 有些酶类对人体疾病有特异性治疗价值, 其中最被重视的是能预防和治疗急性心肌梗死等血栓性疾病的链激（SK）, 尿激酶(UK),及组织纤溶酶原激活剂(t-PA)。 凝血因子 甲型血友病是缺乏Ⅷ因子所致, 乙型血友病是缺乏Ⅸ因子所致, 在血友病发病率中甲型占80%。 以往治疗血友病用凝血因子是从血液中提取的, 血友病人有遭受病毒等病毒感染的危险、用重组技术来生产凝血因子将克服血源性产品的缺点。 d) 基因工程疫苗 基因缺失活疫苗（减法疫苗） 目前这类疫苗中研究最多的是病毒疫苗，如流感病毒。伪狂犬病毒、单纯孢疹病毒（HSV）等。 基因工程活载体疫苗（加法疫苗） 通过表达外源保护性抗原基因，提供免疫保护。 目的基因的克隆； 构建DNA重组体； 构建工程菌（或细胞）； 目的基因表达； 外源基因表达产物的分离分析； 除菌、过滤； 半成品/成品检定； 包装。 二、基因工程药物发展历程 2. 我国基因工程药物的发展历程 20世纪70年代初开始将DNA重组技术应用到医学上。 第一个批准的我国生产的基因工程药物——重组人干扰素ɑ1b(Rhu IFN ɑ1b),1989年开始申报，1993年批准试生产，也是唯一的独创的一类新药。 基因工程药物研发事例 —以胰岛素为例 糖尿病： 糖尿病是个历史悠久的慢性代谢性疾病，有文字记载的历史已有上千年。但对糖尿病病因的了解和治疗上有实质上的进展还不到一百年。 1.国内外研究现状 国外现状 上市药类种类多，幅面广； 研发机制成熟； 投资规模大，抗风险能力强； 利润大，投资回报率高。 国内现状 药品生产多以仿制为主 , 自主开发产品少 1989 年 ,我国科学家成功研制出具有我国自主知识产权的基因工程一类新药 α1b 干扰素 ,成为我国批准生产的第一个基因工程药物 ,也是到目前为止惟一一个由我国自主研制成功的拥有自主知识产权的基因工程一类新药。 同种产品生产厂家过多 新药研发创新的体制尚未形成 医药市场混乱 有关术语解释： DNA嵌合体（DNA chimera）：内、外源DNA插入载体分子所形成的杂合分子（嵌合DNA)。 重组（ recombination）：构建DNA嵌合体分子的过程。 基因克隆示意图 基因工程大事记 1973，Cohen第一例成功的克隆实验； 1978，Genetech公司，人胰岛素，世界上第一种基因工程蛋白药物； 1982，第一个基因工程药物--重组人胰岛素在英、美获准使用； 1985，第一批转基因家畜（兔、猪和羊），转基因鱼； 1993，基因工程西红柿在美国上市; 1997， 英国罗斯林研究所，多莉羊; 1999.9， 中国获准加入人类基因组计划，负责测定人类基因组全部序列的1%; 2000.6.26，科学家公布人类基因组工作草图; 2001.2.11，公布人类基因组基本信息。 自然界的基因转移和重组 基因重组(genetic recombination)——整段DNA在细胞内或细胞间, 甚至不同物种间进行交换, 并能在新的位置上复制, 转录和翻译。 接合作用(conjugation) 质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一个细胞（细菌) 。 转基因动物和植物 转基因动物首先在小鼠获得成功。现在转基因动物技术已用于牛、羊，使得从 牛/羊 奶中可以生产蛋白质药物。称为“乳腺反应器”工程。  转基因植物亦已在大田中广为播种。 美国 GE 公