布病实验室技术培训.安课件.ppt

分类 羊种布氏菌（Bvr.melitensis）1，2，3型； 牛种布氏菌（Br.abortus）1，2，3，4，5，6，7，9型； 猪种布氏菌（Br.suis）1，2，3，4，5型； 沙漠森林鼠种布氏菌（Br.neotemae）； 绵羊附睾种布氏菌（Br.ovis）； 犬种布氏菌（Br.canis）。 陕西省布鲁氏菌病病原学调查分析 自1952年起，在人畜间共分离出3个种233株布鲁氏菌，其中羊种菌227株，占总数的97.4%。牛种3株、犬种3株。1991年以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后则为羊1、3型 。 陕西省是以羊型菌为主、牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫区。流行优势种随时间推移发生了变化。 1.2形态和培养特征 布氏菌属的细菌是一组微小的球杆状的革兰氏染色阴性菌。柯氏染色，布氏菌染成红色，其他菌染成绿色或蓝色。 宽0.3～0.6μm，长0.6～1.5μm。无芽孢、无鞭毛、无质粒、不形成荚膜。 一般说来，羊种菌最小，牛种菌次之，猪种菌最大。 1.2培养特性 营养条件高，生长缓慢，生长所需温度为20-40℃，最适温度为37 ℃.通常要经过4-6天，有的甚至要经过20-30天（双相培养基）才能长出菌落。 1.3抵抗力 对物理因子的抵抗力 对化学因子的抵抗力 不同环境中的抵抗能力 对抗生素的敏感性 布氏菌的抗原成分十分复杂，存在A、M、G成分。A对牛种布氏菌有特异性，M对羊种布氏菌有特异性，G为两种菌共有。还与多种细菌存在共同抗原，因而有血清交叉反应。布氏菌不产生外毒素，只产生内毒素，有致热、致炎作用，可导致休克。 从种上来说，羊种毒力最强，猪种和牛种次之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。 诊断布病的金标准。 3.1.1实验室要求 布氏菌的分离培养要在生物安全二级以上实验室中进行。 布氏菌是高致病性病原微生物，从危害程度来说为第二类病原微生物。 3.1.2方法 采样（采血） 双相培养基 菌株鉴定 （菌落形态观察、涂片、染色、镜检布氏菌诊断血清玻片凝集试验） 种型鉴定（CO2需要与否、H2S的产生的测定、染料抑菌试验、单项因子血清凝集试验、噬菌体裂解试验等等） 3.2.1 血清学诊断的意义 3.2.2 针对布病进行的检验 3.2.3 血清样本的采集和保存 试剂与器材 虎红平板凝集抗原、被检血清、清洁脱脂玻片、微量移液器、枪头。 方法：在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03ml，充分混匀，5min之内观察结果。 结果判定：出现可见的凝集反应就判为阳性；否则就为阴性。 评价：简便快速、容易操作，漏检率极低，适用于基层大面积检疫；容易出现假阳性，临床上需要借助SAT来确认。 注意事项 血清静止的温度和时间对实验结果有很大的影响，在一定的时间和温度范围内，防治时间越长，温度越高，假阳性率越低； 患者空腹血清出现假阳性少； 凡是试验中凝集颗粒不规则，大小不匀，片状或絮状，凝集不清澈者，一般为假阳性，否则凝集颗粒规则，大小均匀，凝集清澈者，一般与SAT结果相符，为阳性。 3.2.2.2、 试管凝集试验 原理：布氏菌侵入机体后，就会刺激机体产生特异性抗体，这种抗体可与相应的布氏菌抗原发生特异性结合，在电解质的作用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也就是用已知抗原查未知抗体。 器材与试剂 实验凝集抗原、被检血清、生理盐水 移液器、吸管、凝集管、试管架、稀释抗原用的玻璃杯、37度温箱。 方法：每份血清取9支小试管，放于试管架上。 血清稀释 稀释抗原后；加入抗原 温育18-22小时 室温放置2小时后观察结果 比浊管配置 试管凝集实验的评价 实验室诊断标准之一 滴度1︰100及以上或病程一年以上者滴度为1︰50及以上为阳性 特异好，实用性、敏感性强 主要检查血清中的IgG和IgM，适合于急性期病人的诊断。 缺点：有前带现象，有时出现假阴性结果；长生一定的交叉反应；出结果慢，需要两天 注意事项 受检血清应新鲜、无溶血、无污染，存放血清处温度不能超过10℃，采血后应于3-4日内进行检查，因放置时间过长可能会导致血清效价降低。 每份血清和抗原要有对照。 个别血清会出现前带现象，建议多做几个管，多采用几个稀释度。 3.2.2.3、抗人球蛋白实验（Coomb’s） 原理：机体受布氏菌抗原刺激后可产生“完全抗体”和“不完全抗体”。不完全抗体可与相应抗原结合，但不出现可见反应。若将预测不完全抗体的人血清球蛋白作为抗原，注射于另一种动物（常用家兔）制成抗球蛋白（抗IgG、IgA、IgM）的抗体，再将此球蛋白