章DNA的复制和修复07课件.ppt

二 、DNA复制的起点和方式 用遗传学和生物化学的方法可以确定大肠杆菌染色体DNA的复制起点在基因图谱上的位置。 DNA聚合酶催化的链延长反应 2.大肠杆菌DNA聚合酶 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 聚合酶IV 和V: 1999年发现,它们涉及DNA的错误倾向修复 (error prone repair） 连接酶连接切口 RNA引物的合成： 以DNA为模板，NTP为原料，在引物合成酶催化下，合成10-几十个核苷酸。 为什么？ 这是保证DNA聚合过程高度精确的又一措施。已知DNA 聚合酶具有3??5?外切酶功能校对复制过程中的核苷酸，也就是说聚合酶在开始形成一个新的磷酸二酯键前，总是检查前一个碱基是否正确，它不能从头开始合成。因此先合成一条低忠实性的多核苷酸来开始DNA的合成，并以核糖核苷酸来表示是“暂时”的，当DNA聚合以后再将其切除，以高忠实性的脱氧核苷酸取而代之，确保复制的忠实性。 DNA复制的调节 DNA复制的调节的调节在起始阶段，一旦开始就一直到完 DNA复制的起始与DNA的甲基化和细菌脂膜的相互作用有关 oriC 位点的回文序列GATC（11个）的甲基化 新合成链的甲基化滞后13 min 3.复制的终止 七、真核生物DNA的复制 哺乳动物的DNA聚合酶 端粒合成的一种模型 第二节 DNA的损伤与修复 三、切除修复 四、重组修复 五、应急反应（SOS）和易错修复 六、与DNA修复有关的人类遗传疾病 2. 遗传性大肠癌、结肠癌的临床特征 3. 与重组修复相关基因的改变 Brca 1、 Brca 2 80%几率患乳腺癌 第三节 DNA的突变 DNA突变的类型 重组 复制 修复 许多造成DNA损伤或抑制修复的处理均能引起一系列复杂的诱导反应，称为应急反应（SOS response)。 SOS反应包括： DNA损伤或抑制修复 诱变效用 细胞分裂抑制等 SOS诱导的修复反应包括： 避免错误的修复（error free repair) 易错修复 (error-prone repair) 未诱导的细胞 靶基因 lexA基因被LexA 蛋白质部分阻遏 recA基因被LexA 蛋白质部分阻遏 （?40个不同的位点被阻遏） LexA(阻遏物) RecA(辅蛋白酶) 靶基因表达 uvrABC 等） lexA靶基因表达 但产物被分解 recA大量表达 RecA促使分解LexA 诱导的细胞 单链DNA ATP 着色性干皮病 是一种隐性遗传性疾病，有些呈性联遗传。因核酸内切酶（与切除修复有关的酶）异常造成DNA修复障碍所致。临床以光暴露部位色素增加和角化及癌变为特征。 幼年发病，常有家族发病史。 多数患者于20岁前因恶性肿瘤而死亡。 错配修复相关基因的改变 : MSH2, MSH6, PMS1 ， MLH1, MSH3, PMS2. Mg2+ 连接酶 ATP或NAD＋ AMP+PPi或NMN+AMP A T C G P T T P P P A A C C T G A P A C P P P P OH T G G A T C G P T T P P P A A C C T G A P A C P P P T G G P 切口 3 3 5 5 5 5 3 3 模板链 模板链 四、DNA的半不连续复制 冈崎片段： 1968年，冈崎等用3H－脱氧胸苷标记T4噬菌体感染的大肠杆菌，然后通过碱性密度梯度离心法分离标记的DNA产物，发现短时间内首先合成的是较短的DNA片段，接着出现较大的分子。最初出现的DNA片段长度约为1000个核苷酸左右，称为冈崎片段（Okzaki fragment）。 复制叉的移动方向 解旋酶 DNA聚合酶III 解链酶 RNA引物 引物体 DNA聚合酶I SSB 3′ 3′ 5′ 前导链 滞后链 3′ 5′ 复制的起始 DNA链的延长 DNA链终止 5′ RNA引物 3′ 3′ 核酸的拓扑结构是指核酸分子的空间结构。两条互相缠绕的双螺旋核酸分子表现出许多拓扑学的关系。在DNA的复制、重组、转录和组装等过程中无不牵涉到其拓扑结构的转变。 拓扑异构酶（topoisomerase)：DNA在复制过程中双链需要解开。能引起DNA拓扑异构反应的酶为拓扑异构酶。DNA拓扑酶催化同一DNA分子不同超螺旋状态之间的转变。 五、复制中的拓扑学问题 DNA拓扑异构酶有两类： 类型Ⅰ的酶——拓扑异构酶Ⅰ，能使DNA的一条链发生断裂和再连接，反应无需供给能量，可减少负超螺旋。 类型Ⅱ的酶——拓扑异构酶Ⅱ（旋转酶），能使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，当它引入超螺旋时需要由ATP供给能量，可引入负超螺旋， 它们协同作用控制