蛋白质的分离与纯探究.ppt

蛋白质的分离与纯化 Selection of protein source 蛋白质原料的选择 ? 选含“目的”蛋白多的原料。 ? 选来源广、容易得到的原料。 ? 用重组DNA技术（recombinant DNA technique）获得大量稀有蛋白质。 常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。 盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。 盐析沉淀蛋白质时，通常不会引起蛋白质的变性。 分段盐析： 半饱和硫酸铵溶液可沉淀血浆球蛋白，而饱和硫酸铵溶液可沉淀血浆清蛋白。 （二）有机溶剂沉淀蛋白质： 凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白质。 沉淀原理是：① 脱水作用；② 使水的介电常数降低，蛋白质溶解度降低。 为了防止蛋白质在分离过程中发生变性，有机溶剂浓度不能太高(30%-50%)，而且需要在低温条件下进行。 （三）层析： 层析（chromatography)是一种利用混合物中各组分理化性质的差异，在相互接触的两相（固定相与流动相）之间的分布不同而进行分离分析的技术方法。 主要的层析技术有离子交换层析，凝胶层析，吸附层析及亲和层析等。 Gel filtration chromatography 凝胶过滤层析（1） ? 凝胶过滤层析(分子排阻层析，分子筛层析): 以具有分子筛效应的颗粒状多孔网状物质为支持物,根据分子大小和形状不同分离物