生理实验方法汇总.docVIP

可溶性蛋白、SOD、POD、CATMDA的测定 一、磷酸缓冲液的配制： 二、酶液的制备：称取0.5—1g（FW）放入研钵中，加5×毫升PH=7.8的磷酸缓冲液，冰浴研磨，匀浆倒入离心管中，12000转oC冷冻离心20分钟，上清液（酶液）倒入试管中，置于0—4oC下保存待用。 三、可溶性蛋白的测定 1、试剂的配制: 牛血清白蛋白标准液（100g/mL）：精确称取0.0100g牛血清白蛋白，用蒸馏水溶解后定容至100mL（4℃保存）。 考马斯亮蓝G-250染色液：取0.10g考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 95%的乙醇中，加入100mL 85%的正磷酸，再用蒸馏水定容到1000mL。过滤待用。该试剂于常温下可保存1个月。 2、标准曲线制作 0—1000μg/ml标准曲线的制作 取6支10ml具塞试管，按下表取样。盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min后，在595nm波长下比色，记录各管测定的光密度OD值，并做出标准曲线。 8 0.6 0.4 0.2 0.0 G-250试剂(ml) 5 5 5 5 5 5 蛋白质含量(μg) 0 200 400 600 800 1000 OD250 2、样品测定 取2支试管（10ml具塞，作为3个重复），按下表加样： 管号 空白 样品 样品 样品 待测样品(ml) 0 0.08 0.08 0.08 DH2O(ml)