基因工程第五章-载体课件.pptVIP

载体的概念：载体是基因工程中携带目的基因进入宿主细胞，可自我或随同宿主DNA的复制而复制，及表达的工具。 载体的条件： 含有复制子：这是一段具有特殊结构的DNA序列，载体有复制起始位点，才能携带外源基因进入宿主后，进行复制，保证子代细胞仍含有外源基因。 有一个或多个利于检测的遗传表型，易于识别和筛选。如抗药性、显色表型、营养缺陷型、荧光表型等. 有一个或几个限制性酶切酶的单一识别位点，便于外源基因的插入。 适当的拷贝数。高拷贝数不仅利于载体的制备，也有利于克隆基因的剂量的增加。 载体的分类：质粒载体――可容纳15KB的外源片断 噬菌体载体――25－45KB 人工染色体－－45KB以上 质粒是一种可进行自我复制的并能独立传播的DNA的一种存在形式，并且自然界中原核生物、真核生物大部分都发现有质粒的存在，所以质粒现在是应用最广的载体 一、质粒的生物学特性： 质粒最初发现于细菌中，是染色体外能自主复制的双链共价闭合的环状DNA分子，是能够进行独立复制并保持遗传恒定的复制子，大小在1――200KB。质粒常含有一些编码对细菌生存有利的基因，比如说抗性基因，降解复杂有机物的酶、细菌素，并且可赋予微生物特殊的外形―――鞭毛、菌毛