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附件3:
改善睡眠功能评价方法(征求意见稿)
保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定
Items, Principles and Result Assessment
1 试验项目
1.1 动物实验
1.1.1体重
1.1.2延长无巴比妥钠睡眠时间实验
1.1.3戊巴比妥钠(或巴比妥钠)阈下剂量催眠实验
1.1.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验
1.2 人体试食试验项目:睡眠状况自评量表(SRSS)总分值
2 试验原则
2.1 动物实验和人体试食试验所列的指标均为必做项目。
2.2需观察受试样品对动物直接睡眠的作用
2.3在进行人体试食试验时,应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。
3 结果判定
3.1 动物实验:延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠(或巴比妥钠)阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验三项实验中任二项阳性,且无明显直接睡眠作用,可判定该受试样品改善睡眠功能动物实验结果阳性。
3.2 人体试食试验:试食组试食后SRSS总分值比试食前有降低,而且与安慰剂对照组比也有降低;或者试食样品前后自身SRSS总分差值比对照组的差值大, 可判定该受试样品具有改善睡眠功能的作用。
改善睡眠功能检验方法
Method for the Assessment of Sleep Improvement Function
1、动物实验
1.1. 实验动物:
推荐用成年小鼠,单一性别,18-22g,每组10-15只。
1.2. 剂量分组及受试样品给予时间
实验设三个剂量组和一个阴性对照组,以人体推荐量的10倍为其中一个剂量组,另设二个剂量组,必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天,必要时可延长至45天。
1.3. 实验方法
1.3.1 直接睡眠实验
1.3.1.1 操作步骤:观察受试组动物给予3个剂量的受试样品,对照组给予同体积溶剂后,是否出现睡眠现象。睡眠以翻正反射消失为指标。当小鼠置于背卧位时,能立即翻正身位。如超过30-60秒不能翻正者,即认为翻正反射消失,进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒,翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间,记录空白对照组与受试样品组入睡动物数及睡眠时间。
1.3.1.2 数据处理及结果判定
睡眠时间为计量资料,采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值F0.05,结论:各组均数间差异无显著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,应改用秩和检验进行统计。
入睡动物数为计数资料,用X2检验,四格表总例数小于40,或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时,应改用确切概率法。
比较对照组与实验组入睡动物数及睡眠时间之间的差异,若入睡动物数或睡眠时间增加有显著性,则实验结果阳性。
1.3.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验
1.3.2.1 原理
在戊巴比妥钠催眠的基础上,观察受试物是否能延长睡眠时间,若睡眠时间延长,则说明受试物与戊巴比妥钠有协同作用。
1.3.2.2 试剂
戊巴比妥钠,用前新鲜配制
1.3.2.3 操作步骤
做正式实验前先进行预试验,确定使动物100%入睡,但又不使睡眠时间过长的戊巴比妥钠剂量(30-60mg/kg),用此剂量正式实验。
动物末次给予溶剂及不同浓度受试样品后,出现峰作用前10-15分钟,给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠,注射量为0.2ml/20g.BW,以翻正反射消失为指标,观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。
1.3.2.4 数据处理及结果判定
一般采用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值F0.05,结论:各组均数间差异无显著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,应改用秩和检验进行统计。
比较实验组与对照组睡眠时间延长之间的差异,睡眠时间延长有显著性,则实验结果阳性。
1.3.3 戊巴比妥钠(或巴比妥钠)阈下剂量催眠实验
1.3.3.1 原理
观察受试物与戊巴比妥钠(或巴比妥钠)的协同作用。由于戊巴比妥钠通过肝酶代谢,而对该酶有抑制作用的药物,也能延长戊巴比妥钠睡眠时间,所以为排除这种影响,应进行阈下剂量实验。
1.3.3.2 试剂
戊巴比妥钠(或巴比妥钠),用前新鲜配制
3.3.3 操作步骤
正式实验前先进行预实验,确定戊巴比妥钠(或巴比妥钠)阈下催眠剂量(戊巴比妥钠16-30mg/kg.bw或巴比妥钠100-150
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