第二章 基因工程工具酶(简化版)课件.ppt

一、限制性核酸内切酶的发现 核酸酶：水解断裂多核苷酸链的两个相邻核苷酸的3,5磷酸二酯键 核糖核酸酶（RNase）： 脱氧核糖核酸酶（DNase）： 核酸外切酶（exonuclease）： 核酸内切酶（endonuclease）： 平末端 粘性末端 1单位酶活性(1unit 1U)：在最适反应条件下1小时完全切割1ugλDNA样品的酶量。 同序同裂酶(识别及酶切位点相同): 同序异裂酶(识别位点相同但酶切位点不同): 同尾酶(酶切位点不同但产生相同的粘性末端): 酶切位点的计算： 四核苷酸识别序列：44 = 256 六核苷酸识别序列：46 = 4096 2个假设：a 随机排列；b GC含量50% 如：用BglⅡ(A/GATC/T)酶切λDNA49Kb）: 理论上的切点数： 49000/4096=12个 实际情况？ 三、限制性核酸内切酶的命名 1973年H.Smith和D.Nathans提议 ①每一种酶都由产生并纯化生出该酶的细菌的种属名中的三个英文字母合起来代表： 第一个字母采用细菌属名的第一个字母大写； 第二和第三个字母小写，采用细菌种名的前两个字母； 　　　如大肠杆菌（Escherichia coli）用Eco表示，代表从大肠杆菌中分离出的限制性内切酶。 ②第四个字母表示菌株的类型（大小写均有），如EcoR中的R代表大肠杆菌