第04章 疫苗的制备与检定技术1.pptVIP

第四章 疫苗的制备与检定技术 生物制品菌(毒、虫)种： 菌、毒种应符合以下4个标准： 选为强毒的菌、毒种应做以下工作： 第04节 灭活剂、免疫佐剂和保护剂 (一)甲醛溶液 (Formaldehyde solution) 灭活用甲醛浓度： （二）烷化剂 (alkylating agent) AEI：N-乙酰基乙烯亚胺 BEI：二乙烯亚胺 GDA：缩水甘油醛 烷化剂的灭活机制： （三）苯酚 (phenol) 石炭酸：苯的一部分被酚取代的化合物。 灭活机制：使微生物的蛋白质变性，或抑制微生物的特异酶系统，使其失去活性。 制备疫苗时的用量：0.3%～0.5%。 （四）结晶紫 (crystal violet) 筛选灭活剂的基本原则： 复习思考题： 概念：灭活、灭活剂 常用灭活剂的种类？ 影响灭活剂灭活的因素？ 铝盐类 油水乳剂 蜂胶 免疫刺激复合物 脂质体 其它 铝盐类佐剂 蜂胶佐剂 油水乳剂 免疫刺激复合物 细胞因子类 CpG DNA 免疫刺激复合物：Immunostimulating complex, ISCOM 细胞因子类佐剂： CpG DNA： CpG DNA：以非甲基化CpG(胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸)基序(motif)为核心的DNA序列 CpG ODN：用化学方法合成的含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide, ODN) 复习思考题： 概念：佐剂 免疫佐剂的类型？ 佐剂能加强免疫反应的机理是什么？ 举出3种常规免疫佐剂，分别说明其特点和应用现状。 三、保护剂或稳定剂 5%蔗糖(乳糖)脱脂乳保护剂 明胶蔗糖保护剂 聚乙烯吡咯烷酮乳糖保护剂 SPGA保护剂 5%蔗糖(乳糖)脱脂乳保护剂： 聚乙烯吡咯烷酮乳糖保护剂： 国产与进口保护剂的差距 保护剂原料从不同角度分类 化学性质 分子量 功能和性质 影响保护剂保护功能的因素： 微生物因素：不同的微生物种类存在结构差异、对外界抵抗力强弱不同、培养方法不同，决定了不同疫苗的保护剂应具有不同的配方。 保护剂组方因素：保护剂原料及其性质、功能、配比、冻干曲线。 最佳保护剂的选择试验： 加保护剂冻干前后的活菌数、病毒滴度的比较。 不同保存条件下和不同保存期的比较试验。 复习思考题： 保护剂或稳定剂的概念？ （一）常规免疫佐剂 常规佐剂1：铝盐类佐剂 1）氢氧化铝胶：铝胶。 2）明矾：硫酸铝钾制成10%溶液，高压灭菌；调菌液pH至8±0.1，加入明矾液1~2%，充分混匀。 3）磷酸三钙：在疫苗中加入氯化钙和磷酸氢二钠，使在疫苗中化合成磷酸三钙，吸附抗原后沉淀。 常规佐剂2：蜂胶(propolis) 蜜蜂采自柳树、杨树、栗树和其它植物幼芽分泌的树脂，并混入蜜蜂上颚腺分泌物，以及蜂蜡、花粉、其它一些有机和无机物的一种天然物质。是一种天然的免疫增强剂。 常规佐剂3：油水乳剂佐剂 由油类物质和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂，是制备兽用灭活疫苗时广泛运用的另一种佐剂。 （二）新型免疫佐剂 由抗原物质与Quil A、胆固醇按1:1:1混合后结合而成的一种具有较高免疫活性的脂质小泡。 ISCOM直径为40nm，每个ISCOM约含10~12分子的蛋白质。 ISCOM的最初报道者是瑞典的Morein(1984)，Quil A是从皂树皮提取的一种糖苷。 由机体的免疫细胞(单核/巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等)及相关细胞(血管内皮细胞、表皮细胞、成纤维细胞等)合成和分泌的一类高活性、多功能的蛋白质多肽分子。 随着合成和重组抗原的日渐增多，应进一步强调合适的佐剂的作用，以确保疫苗的最大活性以及对所有接种者的保护。 用细胞因子作为佐剂，已成为科学家的研究热点。 主要包括白细胞介素-2、白细胞介素-1、白细胞介素-12、γ-干扰素等。 用于菌毒种保存和弱毒疫苗的制备 保护剂 (protector)或稳定剂 (stabilizer)：防止生物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质；冻干生物制品中除抗原物质以外的添加物。 国产保护剂主要包括脱脂牛奶、明胶、蔗糖等，组方简单，保护能力弱，常称之为传统冻干保护剂。 常用的保护剂 1. 配方：蔗糖(或乳糖)5g，脱脂乳100 ml→5％。 2. 配制：充分溶解，100℃蒸汽间歇灭菌3次，每次30min； 或者110～116℃高压灭菌30～40min。 3. 用途：鸡痘、新城疫、鸭瘟活疫苗、猪瘟。 1. 配方：明胶2%～3% (g/ml)、蔗糖5% (g/ml)、硫脲1%～2% (g/ml) 2. 配制：先将12%～18%明胶液、30%蔗糖液和6%～12