植物组织培养的培养基主要成份植物组织培养的培养基主要成份.doc

★植物组织培养培养基的主要成分 1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种氮源通常有硝态氮或铵态氮但在培养基中用硝态氮的较多也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子在近代的培养基中其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁 这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要有的是参与某些生物过程的调节。培养基中的铁离子大多以螯合铁的形式存在即FeSO4与Na2—EDTA螯合剂的混合。 2.碳源培养的植物组织或细胞它们的光合作用较弱。因此需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖用量通常为2-4高者可达5亦可用市售的白糖所代替但一般应增加用量而且最好用比较固定的厂家生产的产品以保证实验的稳定性。 3.有机营养成分包括人工合成或天然的有机附加物包括维生素氨基酸及其它有机物质等。最常用的有酪朊水解物水解乳蛋白、水解酪蛋白CH、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁CM及各种氨基酸如甘氨酸氨基乙酸等。维生素在培养基中加入维生素常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素其中效果最佳的有硫氨素维生素B1、盐酸吡哆醇维生素B6和维生素H生物素、泛酸钙等、肌醇环己六醇、烟酸。在部分培养基中还添加维生素BX氨酰苯甲酸、维生素C抗坏血酸、维生素E生育酚、、维生素B12氰钴胺酸、维生素BC叶酸、维生素B2核黄素和氯化胆碱等维生素。这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。 4.生长调节物质常称为激素 常用的生长调节物质大致包括以下三类 1植物生长素类。主要作用是诱导愈伤组织的产生促进细胞脱分化促进细胞的伸长促进生根。如吲哚乙酸IAA、萘乙酸NAA、IBA吲哚丁酸、NOA萘氧乙酸P-CPA对氯苯氧乙酸、24-D24-二氯苯氧乙酸245-T245-三氯苯氧乙酸和ABT生根粉等。生长素的使用浓度通常为0.110mg/L。 2细胞分裂素。如玉米素Zt6-4-羟基-3-甲基-反式-2-丁烯氨基嘌呤、6-苄基嘌呤6-BA或BAP和激动素Kt6-呋喃氨基嘌呤、2IP异戊烯氨基嘌呤和TDZthidiazuron噻二唑苯基脲等。作用主要是第一促进细胞分裂和扩大与生长素促进细胞伸长的作用不同可使茎增粗而抑制茎伸长第二诱导芽的分化促进侧芽萌发生长第三抑制衰老减少叶绿素的分解。延缓离体组织或器官的衰老过程有保鲜的效果。但是细胞分裂素对根的生长一般起抑制作用。在组培中细胞分裂素的使用浓度通常为0.110mgL。细胞分裂素常常与生长素相互配合用以调节细胞分裂细胞伸长细胞分化和器官形成。 3赤霉素。组织培养中使用的赤霉素只有一种即赤霉酸GA3。虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究但在培养基中很少添加因为它的作用往往是负面的。乙烯等。 5.琼脂或其他支持物 除液体悬浮培养外就目前情况而言琼脂是一种极为理想的支持物。一般浓度0.4-1质量越差的琼脂用量越大。琼脂作为培养基的支持物使培养基呈固体状态以利于各种外植体的培养。 6.其他添加剂含天然提取物、抗生素等 活性炭 渗透调节剂 抗生素 抗氧化剂等。 活性炭加入培养基中的目的主要是利用其吸附能力减少一些有害物质的影响例如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。这在兰花组织培养中效果更明显。另外活性炭使培养基变黑有利于某些植物生根。但活性炭对物质吸附无选择性既吸附有害物质也吸附有利物质因此使用时应慎重考虑不能过量一般用量为1—5。活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应。在失去胚状体发生能力的胡萝卜悬浮培养细胞中加入1一4活性炭可使胚状体的发生能力得以恢复。 7.水 水是植物原生质体的组成成分也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸馏水以保持母液及培养基成分的精确性防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水以防成分的变化引起不良效果。 8.pH 培养基的pH因培养材料不同而异大多数植物都要求在pH5.6—5.8的条件下进行组织培养。常用0.1mol/L的Na0H和0.1mol/L的HCl来调节培养基的PH。但需注意两点第一经高温高压灭菌后培养基的PH会下降0.2—0.8故调整后的PH应高于目标pH0.5个单位第二pH的大小会影响琼脂的凝固能力一般当pH大于6.0时培养基将会变硬低于5.0时琼脂就不能很好地凝固。 培养基种类根据培养基态相不同分为固体培养基与液体培养基。固体培养基是指加凝固剂多为琼脂的培养基其优点是外植体只是部分接触