第三章原料的预处理课件.pptVIP

2.干燥法 可采用多种方法使细胞干燥，如空气干燥法、真空干燥法、喷雾干燥法和冷冻干燥法等。干燥法使细胞壁膜间的结合水丧失，细胞渗透压改变。当用丙酮、丁醇或缓冲液等对干燥细胞进行处理时，细胞内物质就很容易被抽提出来。空气干燥法适用于酵母，真空干燥法适用于细菌，冷冻法适用于不稳定的酶。 3．压力差破碎法 通过压力的突然变化，使细胞破碎的方法称为压力差破碎法。常用的方法有高压冲击、突然降压及渗透压变化等方法。 （1)高压冲击法是在结实的容器中装入细胞和冰晶、石英砂等混合物，然后用活塞或冲击锤施以高压冲击，压力可达50～500 MPa,从而使细胞破碎。 (2)突然降压法又称为爆炸式降压法。该方法是将细胞悬浮液装入高压容器，通入氮气或二氧化碳，加压5～50 MPa，振荡几分钟，使气体扩散到细胞内，然后骤然排出气体，使压力骤降至常压，导致细胞迅速膨胀而破碎。 (3)渗透压破碎法是一种较温和的细胞破碎法。 将细胞放在高渗透压的介质中（如一定浓度的甘油或蔗糖溶液），达到平衡后，介质被突然稀释，或者转入渗透压低的缓冲液或纯水中，由于渗透压的突然变化，水迅速进入细胞内，引起细胞溶胀而破裂。 4．改进高压法 改进高压法（X－press法）是将浓缩的菌体悬浮液冷却至－30～－25℃形成冰晶，利用500 Mpa以上的高压冲击，将冷冻细胞从高压阀小孔中挤出。细胞由于冰晶的磨损变脆而破碎。该方法的细胞破碎率高，碎片的粉碎程度低，活性的保留率高，但是不适用于提取对冷冻－融解敏感的酶。 5．超声波破碎法 通过超声波使细胞膜产生空穴的作用而使细胞破碎。超声波的频率对细胞破碎的效果没有显著影响，通常采用的频率是15～25 kHz，所破碎细胞的程度除与输出功率和破碎时间密切相关外，还受细胞浓度、溶液黏度、pH、温度以及离子强度等因素的影响，使用时需根据细胞的种类和酶的特性而加以选择。 6. 微波破碎法 微波破碎细胞专利技术是基于微波加热的选择性、瞬时性和高效性，控制适宜的微波条件而实现细胞破碎。其原理是将含水分的微生物菌体及植物组织置于一定强度的微波场中处理，使细胞受热，水分汽化，内压增大而导致细胞破碎。 （三）化学破碎法 某些化学试剂，如有机溶剂、变性剂、表面活性剂、抗生素、金属螯合剂等，可以改变细胞壁或细胞膜的通透性（渗透性），从而使胞内物质有选择地渗透出来，这种处理方法称为化学渗透法或化学破碎法。常用的化学试剂是有机溶剂和表面活性剂。 （四）酶学破碎法（即生物学法） 通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到破碎细胞的方法称为酶学破碎法，或称为酶促破碎法。这是一种应用较广泛的方法，其原理是利用酶反应分解破坏细胞壁组分间的特殊化学键，从而达到破碎细胞的目的。酶溶法可分为外加酶法和自溶法两种。 1.外加酶法 外加酶法就是根据细胞壁的结构和组成特点，选用适当的酶，破坏细胞壁，并在低渗透压的溶液中使细胞破裂。其中溶菌酶( lysozyme)的应用最广，能专一地分解细胞壁上肽聚糖蛋白分子的β－1，4－糖苷键，主要对象为革兰氏阳性细菌。该法的优点在于专一性强，条件温和，但是费用较贵，一般只适用于小规模研究。 2.自溶法 自溶法(autolysis)是一种特殊的酶溶方式，所需的溶胞酶由生物细胞自身产生。当细胞在一定的pH和适宜的温度条件下保温一段时间后，即可通过细胞自身存在的酶系将细胞破坏，使细胞内物质释出，其效果取决于自溶条件。 二、TP的选择性释放 细胞破碎的目的是要得到一种或多种TP。因细胞内存在着许多生物物质，有的放矢地选择性释放TP,而使其他物质尽量少的释放出来就显得十分重要。如利用化学渗透法选择性释放TP（图10-2）。 选择性释放TP的一般原则如下： (1)仅需破坏或破碎TP存在的靶位点。当TP存在于细胞膜附近时，可采用酶学破碎法、反复溶冻法等较温和的方法；当TP存在于细胞质内时，则需采用较为强烈的机械破碎法。 (2)选择性溶解TP。当TP与细胞膜或细胞壁结合时，一方面调整溶液的离子强度、pH或添加表面活性剂、螯合剂等与TP有亲和性的试剂，使TP溶解释放；另一方面注意溶液的性质，使其他杂质不易释放。 三、TP的提取 提取是指在一定条件下，用适当的溶剂处理原料，并从原材料中把有效成分分离出来的过程。经过预处理和细胞破碎的原材料，可用缓冲液、稀酸、稀碱或有机溶剂等抽提有效成分，甚至还可以用蒸馏水直接抽提。 理想的抽提溶液一般应具备如下特点：对有效成分溶解度大而破坏性小；对杂质不溶解或溶解度很小；来源广泛、价格低廉、操作安全等。抽提的原则是“少量多次”，即对于等量的用于抽提的溶液，分多次抽提比一次抽提效果要好。 四、TP的初级分离 TP的初级分