盐酸克仑特罗酶联免疫(ELISA).docVIP

盐酸克仑特罗酶联免疫(ELISA) 快速检测试剂盒 盐酸克仑特罗酶联免疫(ELISA)快速检测试剂盒 1 概要 盐酸克仑特罗（瘦肉精）为一种人工合成的β肾上腺素兴奋剂，具有扩张支气管的作用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时，具有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此俗称为“瘦肉精”。在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质，同时也造成食品中盐酸克仑特罗（瘦肉精）的残留。当人们食用盐酸克仑特罗残留的产品后的中毒症状。盐酸克仑特罗TMB底物系统显色，样本吸光度值与其所含盐酸克仑特罗量成负相关，与标准曲线比较即可得出盐酸克仑特罗含量。 3 试剂盒组份 每个试剂盒中的试剂可进行96个测量（包括标准测定），试剂盒组份： 包被有抗盐酸克仑特罗抗体微孔板 96孔 盐酸克仑特罗标准溶液 1.5 mL /瓶（6瓶） 分别为0号：0 ppb ；1号：0. ppb ；2号：0. ppb ；3号： ppb ；4号： ppb ；5号：8ppb 盐酸克仑特罗-HRP标记物 1瓶(6 mL) 20×浓缩洗涤液 1瓶(50 mL) 底物溶液A 1瓶(7 mL) 底物溶液B 1瓶(7 mL) 终止液（含2 M的硫酸） 1瓶(6 mL) 封板膜 3张 说明书 1份 4 另外所需试剂和仪器 4.1 试剂： 0.01 M PBS（pH 5.5-6.0）：称取8 g NaCl，2.9 g Na2HPO4· 12H2OH2PO4，加超纯水溶解，调pH至 5.5-6.0，定容至1000 mL。 0.05 M HCl：取0.83 mL HCl（36%-38%），加超纯水定容至200 mL； 1 M NaOH：称取4 g NaOH，加超纯水溶解后定容至100 mL； 0.5 M KH2PO4缓冲液（pH3.0）：称取6.8 g KH2PO4加入80 mL超纯水溶解后，用磷酸调节pH至3.0，加超纯水溶解后定容至100 mL； 0.1 M HCl：取0.83 mL浓盐酸加去离子水混匀定容至100 mL； 4％氯化钠：称取4 g氯化钠加去离子水混匀定容至100mL； 4％氯化钠－0.1 M盐酸混合液：量取70 mL 4％氯化钠溶液、20 mL 0.1 M盐酸溶液和10 mL超纯水（或双蒸水）混匀； 4.2 仪器 — 微孔板酶标仪（450 nm） — 天平（精度0.01 g） 匀浆器 超声波清洗器 — 振荡器 — 离心机和离心管 — 针筒式微孔过滤膜（0.45 μm） 旋转蒸发器 氮气吹干仪 — 可调式20 μL-200 μL 和100 μL-1000 μL微量移液器 5 样本处理 5.1 尿液试样的处理 尿液不用处理，可直接取100 μL进行检测（如果尿液混浊，建议实验前先进行10000 rpm离心5 min或过滤，用上清检测）。 5.2 肌肉、脏器等动物组织试样的处理 5.2.1 方法一 取5 g（精确到0.05 g）粉碎匀浆的样本，加入25 mL 0.05 M HCl，振荡混匀20 min；称取6 g均质物(相当于1 g样本)加入离心管中，10-15°C 4000 rpm离心15 min；取上清到另一试管中，加入300 μL 1 M的NaOH，混合10 min；加入4 mL 0.5 M pH3.0的磷酸二氢钾缓冲液，混合后在4°C放置至少1.5 h或过夜；在10-15°C 4000 rpm离心15 min，吸取全部上清，室温放置，待回温后用RIDA C18柱纯化 附：RIDA C18柱纯化 用3 mL无水甲醇洗涤C18固相萃取柱，然后用2 mL 0.05 M pH3.0磷酸-磷酸二氢钾缓冲液淋洗（注意：控制流速在1滴/s）。将处理好的样品液全部过柱（注意：样品上柱时控制流速在15滴/min），再用2 mL 50 mM pH 3.0磷酸-磷酸二氢钾缓冲液淋洗萃取柱，用洗耳球将柱吹干。用2 mL无水甲醇洗脱，收集洗脱液，于50～60°C下用氮气缓缓地吹干。用1 mL 0.01 M PBS（pH 5.5-6.0）溶解残留物，取100μL进行检测。 5.2.2 方法二 称取2 g（精确到0.02 g）均质样品于50 mL离心管中，加入6 mL 4％氯化钠－0.1 M盐酸混合液，漩涡混合器充分混合，静置20min，10000 rpm离心5 min。取1 mL上清液加入1 M NaOH调节pH5.5-6.0之间，取100