克隆载体 λ噬菌体整个基因组如图所示,可分为三个部分 ?①左臂:从A到J长约20kb,其中的基因编码构成头部、尾部、尾丝对组装完整噬菌体所需要的蛋白质。 ②中段:长约20kb,是λDNA整合和切出,溶原生长所需的序列。 ③右臂:长约10kb,是调控区,控制溶菌和溶原生长最重要的调控基因和序列、以及λDNA复制起始均在这区域内。左右臂包含λDNA复制、噬菌体结构蛋白合成、组装成熟噬菌体、溶菌生长所需全部序列;对溶菌生长来说,中段是非必需的。 允许外源 DNA 片段替换非必须 DNA 片段的载体,称为置换型载体(replacement vectors)。一般情况下,置换型载体克隆外源片段的大小范围是 9-23kb ,故而该载体主要用来构建基因组文库。???????? 表达载体 pET-5a 是典型的 pET 载体,其组成是在载体的基本结构的基础上加入了 T7 噬菌体启动子序列及其下游的几个酶切位点。当外源基因插入到这些酶切位点后,就可在特定的宿主细胞中诱导表达。 M13 噬菌体颗粒是丝状的,只感染雄性大肠杆菌。感染宿主后不裂解宿主细胞,而是从感染的细胞中分泌出噬菌体颗粒,宿主细胞仍能继续生长和分裂。 M13 噬菌体颗粒为丝状长管状结构,长 880nm ,直径 6-7nm 。噬菌体颗粒的核心由 2700 个基因 Ⅷ 编码的结构蛋白呈管状排列而成,成熟的基因 Ⅷ 的产物为由 50
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