细胞生物学第2次实验课件.pptVIP

细胞生物学与遗传学教研室 遵义医学院 2009年9月研制 第二次实验 Ⅰ 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 Ⅱ 细胞内DNA和RNA的原位显示 [实验目的] 1.掌握酸、碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的分布情况； 2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的原理和方法。 [实验原理] 由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色， 即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。 核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理 甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA的分布部位。 [实验用品] 95%乙醇 三氯醋酸 甲基绿-派洛宁 0.1%酸性固绿 0.1%碱性固绿 [操作流程] 暴露 胸腔 双毁髓法处死 取心脏血 晾干 制 血涂片 固定10min 90℃25min 洗涤1min 反复冲洗 三氯醋酸 95%乙醇 0.1%酸性固绿 5min 0.1%碱性固绿 30min 晾干 镜检 冲洗5秒 晾 干 洗 涤 甲基绿派洛宁