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中国人肌营养不良症患者蛋白基因缺失的研究 关键词：肌营养不良;基因;缺失 　　摘要:目的了解中国人Duchenne和Becker型肌营养不良症患者基因缺失情况。方法用覆盖dystrophincD-NA全长%的5个dystrophincDNA探针检测41名无亲缘关系的DMD/BMD患者。结果22名患者存在基因突变，其中DMD患者的检出率为%:BMD患者的检出率为45%。21名患者存在基因缺失，占检出数的%。结论缺失主要分布在cDNA8检测区，其次在cDNA1-2a检测区。 　　关键词:肌营养不良;基因;缺失 　　StudyonthegenedeletioninpatientswithDuchennemusculardystrophy. 　　　　Abstract:ObjectiveToinvestigatethecircumstancesofgenedeletionofChinesepatientswithDuchnne’tsw%%，%%.%范文之家提[中国人肌营养不良症患者蛋白基因缺失的研究http:// 欢迎您访问范..文.家]供整理}rentexonsandextent. 　　Keywords:Musculardystrophy;Gene;Deletion 　　Duchenne和Becker型肌营养不良症是我国最常见的与X染色体连锁的隐性遗传性疾病，发病率约1/3300活男婴［1］。该病系肌营养不良蛋白基因突变所致［2，8］。DMD患者在2～3岁出现肌无力，渐发展成不能行走，12岁开始依赖轮椅，20岁左右常因呼吸衰竭死亡;BMD患者临床症状较缓和，大多在15岁以后的某个时期依赖轮椅，但有的直到60岁仍能行走［1］。 　　1对象和方法 　　研究对象41名无亲缘关系的DMD/BMD患儿标本随机收集自解放军总医院肌病门诊。其中DMD患者30名，年龄在2～23岁;BMD患者11名，年龄在12～38岁。根据进行性肌萎缩、肌无力，腓肠肌假性肥大，家族史，血清CK值显著增高，肌电图呈肌源性损害，肌活检示肌肉坏死、变性、再生、结缔组织增生等特征确诊患者。取5名正常女性标本作为对照。 　　方法实验所用dystrophincDNA探针菌种购自美国ATCC公司。采用碱变性法抽提质粒DNA［3］，用限制性内切酶EcoRI和/或HindⅢ酶切质粒，电泳分别回收5个探针片段:cDNA1-2a，cDNA4-5a，cDNA5b-7，cDNA8和cDNA9。随机引物法将α-32p-dCTP标记于cDNA探针上［4］。按Smith方法制备白细胞DNA［5］，用HindⅢ完全酶解后于%的琼脂糖凝胶中电泳36～48h，再经Southern印迹将DNA转移至尼龙膜上，固定后置于预杂交液中，65℃预杂交3h，加入变性后的探针继续于65℃杂交12h［6］。-70℃放射自显影3～7d，冲片后分析结果。 　　2结果 　　用覆盖dystrophin全长%的上述5个cDNA探针，从41名病人中检出22例有基因突变，占全部患者的%。其中DMD病人17名，占DMD病人的%;BMD病人5名，占其患者数的%。22例基因突变中，21例为基因缺失，另1例为存在一异常的连接片段，其具体突变类型未被检出。如表1所示。 　　3讨论 　　缺失突变从表1中看到，21例缺失不规则地分布在cDNA检测区。缺失相对集中在两个区域:cD-NA8检测区和cDNA1-2a检测区。cDNA5b-7和cDNA9检出的9例缺失中，有8例缺失区延伸至cDNA8检测区。这种缺失区分布特征与国外大综报道一致［7］。 　　缺失所累及的外显子数目不一，或为一个，或达28个。每个外显子受累频度亦不相同，或为1次，或为13次，见表1。外显子受累频率为PCR检测患者提供了参考依据。 　　表141例DMD/BMD患者的缺失情况 　　Tab1DeletionsOf41DMD/BMDPatients 　　*注:本组患者中共有21例患者存在缺失突变。Note:21caseswithdeletionmutations. 　　Dystrophin基因位于Xp21区带，长达2300Kb，是迄今所知最长的一个基因［8］。该基因外显子9-60之间有26个同源顺序，它们在姊妹染色体分裂过程中较容易发生染色体内同源顺序重组，造成同源顺序间的DNA丢失［7］。由于同源顺序多，分布广泛，同源顺序重组致使DNA断裂点多，缺失位置和范围不定，可以解释DMD/BMD患者dystrophin基因内形式多样的 { http://本,资.料/,于/范文.之.家 ) 缺失突变。