第真核生物的.pptVIP

第七章 真核生物的克隆载体 引言 在真核生物中进行基因操作的必要性 1、原核生物缺乏许多真核细胞所共有的功能 例如：ATP合成系统在线粒体上的定位 DNA与组蛋白的结合 有丝分裂与减数分裂 细胞的专性分化 2、利用酿酒酵母作为模式种的优点 A、容易生长和操作 B、是目前研究的最为清楚的真核生物（基因组的组成，有关的生命 活动的过程） C、酵母中存在很多人类基因组的同源基因，可作为替代宿主（在酿酒酵母的菌株中表达哺乳动物类固醇受体序列，可以模拟哺乳动物类固醇受体介导的信号转导和转录调控。） 7.1 酵母和其他真菌的载体 7.1.1 酵母和其他真菌的载体 酵母2μm质粒 优点：大小合适 在酵母中的拷贝数比较高 有独立的复制原点 缺点：无筛选标记 在酵母中通常用什么筛选标记来对重组克隆进行筛选呢？ 寄主（酵母）是营养缺陷型的突变体 通过载体上携带相应的野生型基因，互补酵母发生突变的基因，从而达到筛阳性重组子的目的。 以LEU2为例 酵母突变体leu2-不能在缺少了LEU的基本培养基上生长，因该突变体中与LEU生物合成有关的酶发生了突变 只有通过外源转入相关的基因后，才能使该突变体在基本培养基上生长。 7.1.2 基于2μm质粒：酵母游离型（附加型）质粒