细胞死亡判定讲课用第四节.pptVIP

细胞死亡判定 中南大学生物科学与技术学院 李杰 jlee@mail.csu.edu.cn 提 纲 细胞死亡判定意义 细胞死亡定义及判定方法 细胞死亡判定方法中存在的问题 细胞死亡判定方法使用—兼谈人体死亡判定 一 细胞死亡判定意义 种子筛选 发 酵 抗癌药物筛选 二 细胞死亡定义及判定方法 细胞死亡的定义 细胞因受严重损伤而累及胞核时，呈现代谢停止、结构破坏和功能丧失等不可逆性变化，此即细胞死亡 呼吸- 代谢- 繁殖 平板计数法 克隆形成实验clonogenic assay MPN most probable number 屏障作用 2.1 细胞膜完整性 显微镜观察？ 电子显微镜？ 染料类别 常见膜完整性检测用染料 传统可见染料：甲基蓝、Evan’s Blue、 Neutral Red 传统可见染料的不足 EB FDA 流式细胞仪应用 流式细胞仪的优点 准确 快速：一般分选速度＞1000个/秒 大量 多参数同时分析（形状，尺寸大小，荧光颜色及强度） PI Annexin V-FITC分析细胞凋亡 2.2 细胞膜电位 测定细胞膜电位染料 3. 能量相关 ATP测定方法 ATP ATP法特点 敏感性高：可检测最少20个细胞 适用范围较广：可对实体瘤、胸腹水、血液等多种肿瘤标本进行体外药敏检测 时间短： 30-60分钟内 Tetrazolium 家族