2012年苹果茎痘病毒RT-PCR检测体系的建立.docVIP

苹果茎痘病毒RT-PCR检测体系的建立 学生：钟敏 指导教师：王亚南 （河北农业大学植物保护学院 河北保定 071000） 摘要：苹果为世界四大水果之一，河北省是我国渤海湾苹果产区的重要省份之一，苹果种植面积位居全省果品面积首位。苹果病毒病是苹果生产的大敌，目前，河北省苹果病毒病的发生情况还不清楚，而且由于苹果组织中含多糖多酚、苹果病毒含量低，苹果病毒检测体系还不成熟。本研究针对以上问题，对苹果茎痘病毒（Apple stem pitting virus，ASPV）扩增引物筛选RT-PCR检测体系及程序进行优化。扩增引物RT-PCR体系得出，在25μL 总体系中，最佳cDNA模板量为0.25 μL、3’与5’端引物1.0 pmol、dNTPs 2.5 μL；通过对PCR程序的优化得出，rTaq最适用量为.50 U、循环次数35个循环、最适退火温度为5℃。最后通过对RT-PCR产物进行测序，目的片段DNA序列，与已发表的序列相似性达82%-90% 关键词：苹果茎痘病毒；引物筛选；RT-PCREstablishment of RT-PCR detection system for Apple stem pitting virus Candidate： ZHONG Min Advisor： WANG Ya-nan (College of plant protection, Agricu