实验五 粗蛋k白含返量测定 陈金莲 201030620103.docVIP

实验五 粗蛋白含量测定（半微量凯氏定氮法） 10生物工程1班 1 实验原理 食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。 试剂和材料 除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的三级水。 .1 硫酸铜（CuSO4·5H2O）。 .2 硫酸钾（K2SO4）。 .3 硫酸（H2SO4 密度为1.84g/L）。 .4 硼酸（H3BO3）。 .5 甲基红指示剂（C15H15N3O2）。 .6 溴甲酚绿指示剂（C21H14Br4O5S）。 .7 亚甲基蓝指示剂（C16H18ClN3S·3H2O）。 .8 氢氧化钠（NaOH）。 .9 95%乙醇（C2H5OH）。 .10 硼酸溶液（20 g/L）：称取20 g 硼酸，加水溶解后并稀释至1000 mL。.11 氢氧化钠溶液（400 g/L）：称取40 g 氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100 mL。 .12 盐酸标准滴定溶液（0.0500 mol/L）。 .13 甲基红乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g 甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。 .14 亚甲基蓝乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g 亚甲基蓝，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。 .15 溴甲酚绿乙醇溶液（1 g/L）：称取0.1g 溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100 mL。 .16 混合指示液：2 份甲基红乙醇溶液（.13）与1 份亚甲基蓝乙醇溶液（.14）临用时混合。也可用1 份甲基红乙醇溶液（.13）与5 份溴甲酚绿乙醇溶液（.15）临用时混合。 仪器和设备 .1 天平：感量为 1mg。 .2 定氮蒸馏装置：如图 1 所示。 .3 自动凯氏定氮仪。 步骤 .1 消化 称取0.5g奶粉，用称量纸包好放入烧瓶，将消化剂（CuSO4+K2SO4)放入烧瓶底，加15ml浓H2SO4，连接仪器，消化（先小火后大火），当烧瓶中物质由黑色变澄清再变绿色，消化完后取下烧瓶加盖，放在隔热板上，待冷却至65oC,用漏斗将消化液移到容量瓶中定容100ml。 4.2 清洗 取下装置中的冷凝管，清洗干净。 4.3 测定 好定氮蒸馏装置NaOH，取硼酸15ml于三角瓶中（提前清洗干净），加入3滴混合指示剂，连接好蒸馏装置，当指示剂由红变蓝时，再继续蒸馏约30min，进行滴定。 4.4 滴定 用标定好的盐酸滴定硼酸吸收至粉色，记录用量 5 实验数据的记录与结果 滴定硼酸的盐酸用量 空白消耗V2 样品消耗V1 Hcl用量（ml) 0 8.3 试样中蛋白质的含量按式（1）进行计算。 式中： X——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100 g）； V1——试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL）； V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，单位为毫升（mL）； V3——吸取消化液的体积，单位为毫升（mL）； c——硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； 0.0140——1.0 mL 硫酸[c (1/2H2SO4)＝1.000 mol/L]或盐酸[c (HCl) ＝1.000 mol/L]标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（g）； m——试样的质量，单位为克（g）； F——氮换算为蛋白质的系数。一般食物为6.25；纯乳与纯乳制品为6.38；面粉为5.70；玉米、高粱为6.24；花生为5.46；大米为5.95；大豆及其粗加工制品为5.71；大豆蛋白制品为6.25；肉与肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵为5.30；复合配方食品为6.25。 　　小故事3、老人与黑人小孩子 　　一天，几个白人小孩在公园里玩。这时，一位卖氢气球的老人推着货车进了公园。白人小孩一窝蜂地跑了上去，每人买了一个气球，兴高采烈地追逐着放飞的气球跑开了。白人小孩的身影消失后，一个黑人小孩怯生生地走到老人的货车旁，用略带恳求的语气问道：“您能卖给我一个气球吗?” 　　“当然可以，”老人慈祥地打量了他一下，温和地说，“你想要什么颜色的?” 　　他鼓起勇气说：“我要一个黑色的。” 　　脸上写满沧桑的老人惊诧地看了看这个黑人小孩，随即递给他一个黑色的气球。 　　他开心地接过气球，小手一松，气球在微风中冉冉升起。 　　老人一边看着上升的气球，一边用手轻轻地拍了拍他的后脑勺，说：“记住，气球能不能升起，不是因为它的颜色，而是因为气球内充满了氢气。” 　　大道理：成就与出身无关，与信心有关。这个世界是用自信心创造出来的。有自信，积极的面对自己所拥有的一切，这种积极和自信会帮助人登上成功的山顶。 　　小故事4、