2016高中生物_5.3_血红蛋白的提取和分离_新人教版选修1精选.pptVIP

初次离心后的结果 3次洗涤后的结果 (2)血红蛋白的释放： 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液： ①过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min。②试管中溶液层次：第1层（最上层）：甲苯层（无色透明）；第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）；第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）；第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）。③分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 二、实验操作 （2）释放血红蛋白 思考： 释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质？ 为了加速释放过程，采取了什么措施？ （使用磁力搅拌器充分搅拌） 目的分析： 蒸馏水的作用是______________________________。 加入甲苯的作用是____________________________。 充分搅拌的目的是____________________________。 使红细胞大量吸水胀裂 溶解红细胞的细胞膜 加速红细胞的破裂 （蒸馏水，40%体积的甲苯） 磁力搅拌器 搅拌器转子 搅拌器正在工作 3.分离血红蛋白溶液： 将搅拌好的混合溶液转移到离心管中，以2000r/mim的速度离心10mim后，可以看出溶液分为4层，从上往下数，第一层是无色透明的甲苯层，第二层为白色薄层固体，是脂溶性物质沉淀层，第三层为红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第四层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀物，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体 第1层：（ ）甲苯层 第2层：（ ）色薄层固体 （ ）的沉淀层， 第3层: （ ）的液体 （ ）的水溶液层 第4层:其它杂质（ ）的沉淀层 无色透明 脂溶性物质 白 血红蛋白 红色透明 暗红色 用 过滤 ，除去 ，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。 滤纸 脂溶性沉淀层 .分离血红蛋白 分离过程: 红细胞 混合液 高速离心 10min 离心管 滤纸 过滤 脂类物质 烧杯 2.粗分离----透析（去除分子量较小的杂质） （1）用 方法进行粗分离，透析袋由半透膜制 成，常用 。将透析袋放入 溶液中进行透析。 （2）透析的原理是 （3）透析的目的是 。 透析 玻璃纸、肠衣、膀胱膜 透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内 去除样品中分子量较小的杂质 磷酸缓冲 取( )ml的血红蛋白溶液装入（ ）中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的（ ）中，pH为（ ），透析12小时，目的是（ ）或用于更换样品中的（ ）。 除去样品中分子量较小的杂质 透析袋 磷酸缓冲液 7.0 缓冲液 4. 透析（粗分离） 1 透析过程中如何去除无机盐离子和小分子有机物？ 半透膜的选择透过性，大分子物质不能通过半透膜，离子和小分子能够通过半透膜。在透析过程中，血红蛋白溶液中的离子和小分子不断通过半透膜扩散进入到pH＝7的磷酸缓冲液中。 透析过程中为何使用pH＝7的磷酸缓冲液？为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液量？ 维持血红蛋白的正常特性。有利于杂质分子充分地向外扩散。 （一）样品处理 1、红细胞的洗涤： 2、血红蛋白的释放： 3、分离血红蛋白溶液： 4、透析：（如何除无机盐离子和小分子有机物质呢？） 血液＋柠檬酸钠→低速短时离心→吸出上层血浆→红细胞＋5倍体积生理盐水 →缓慢搅拌10m