饲料色氨酸含量测定课件.pptVIP

饲料中色氨酸测定方法——分光光度法 制作人： 色氨酸（Try） 色氨酸β-吲哚基丙氨酸，为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。鱼类的必需氨基酸。色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质。 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 原理 　　饲料中蛋白质经碱水解后，降解成多肽和游离的氨基酸，在酸性介质中，氧化剂存在下，色氨酸吲哚环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 试剂 除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。 硫酸溶液：量取 589mL硫酸徐徐加入约350mL水中，冷却 后用水稀释至1L。 1％对二甲氨基苯甲醛溶液：1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于 21.2mol/L硫酸中并定容100mL。 0.2％亚硝酸钠溶液（ m / V ）。 10％氢氧化钾溶液（ m / V ）。 L-色氨酸，色谱纯。 L-色氨酸标准溶液：准确称取 25.0mg L-色氨酸于小烧杯 中，加少量0.1mol/L氢氧化钾溶液使之溶解，定量地转移到 250mL棕色容量瓶中，用水定容，浓度为100 μ g/mL。 注：本标准溶液 4℃冰箱中保存，一个月内使用，浓度不变。 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 仪器、设备 分析天平：感量0.1mg。 分光光度计。 离心机：转速4000r/min。 实验室用粉碎机。 培养箱。 容量瓶：25mL、50mL、250mL。 10mL具塞试管。 刻度吸管：0.5mL、2mL、5mL、25mL。 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 试样的制备 1.选取有代表性的试样，按四分法缩分至200g，粉碎，全部通过0.25mm孔径筛（60目）。 2.按GB 6433 脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混匀，装入密封容器内备用。 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 分析步骤 1.工作曲线的绘制 （1）吸取色氨酸浓度为100 μ g/mL的标准溶液5.00、7.50、 10.00、12.50、15.00、17.50mL分别置于25mL棕色容量瓶中 用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20、30、40、50、60、70 μ g/mL。 （2 ）吸取各浓度溶液1mL，分置具塞试管中，空白管加 1mL水向每支试管内加入氢氧化钾溶液1mL，混匀，将试管放 入冷水盆中，加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，从冷水盆中取出 试管，摇匀，在室温（20～30℃，下同）放置30min。 （3 ）向上述每支试管内加0.2mL亚硝酸钠溶液，摇匀，室 温放置25min。 （4 ）以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各 溶液吸光度值。 （5 ）以色氨酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工 作曲线，或列出回归方程式。 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 2.样品测定 （1）称样：按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精 确至0.1mg。 （2） 水解：将试样置于50mL容量瓶中，在轻轻振摇中缓 慢加入25mL氢氧化钾溶液，使试样湿润且不粘壁，置40±1℃ 培养箱中水解16～18h。 （3）离心：取出水解液冷却至室温后，用水定容，摇匀， 取部分水解液以4000r/min转速离心15min。 （4）显色：取2mL上清液置具塞试管中，并将试管放入冷 水盆中，加入5mL对二甲氨基苯甲醛溶液，摇匀。每个试样另 取2mL上清液于具塞试管中，加5mL硫酸溶液作为样品空白， 摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL亚硝酸钠 溶液，摇匀，室温放置25min。 （5）比色：以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测 定样品溶液的吸光度值。 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 计算公式 测定方法：分光光度法GB/T 15400-94 结果的表示 两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留二位小 数。试样脂肪含量小于4%时，式(1)和(2)所得结果在允许偏差 之内。 重复性 两个平行样品测定值的相对偏差，当色氨酸含量小于0.1% 时，不大于4%；0.