DNA的转录ppt课件.pptVIP

ribonucleic acid---RNA 二、参与转录的酶类 三、转录过程 * 底物NTP 产物RNA n1ATP n2GTP n3UTP n4CTP RNA聚合酶 Mg2＋/Mn2＋ DNA模板 n1AMP n2GMP n3UMP n4CMP ＋ (n1+n2+n3+n4)PPi 在RNA聚合酶的催化作用下，以DNA为模板，四种核糖核苷三磷酸(NTPs)为原料合成RNA的过程。 一、转录的相关概念： 1. 转录(Transcription) 转录过程中碱基配对差异： 模板链(template strand)：在转录过程中直接参与指导RNA合成过程的DNA链，其序列与新合成的RNA链互补。 编码链(coding strand)：在RNA合成过程中不直接参与指导RNA合成的DNA链，其序列与新合成的RNA链对应。 DNA RNA 模板链 编码链 转录本 RNA聚合酶 1. 原核细胞RNA聚合酶 核心酶(core enzyme)：α2ββ 全酶(holoenzyme)：α2ββ σ 功能不详。 1 9 ω 识别亚基：可识别启动子，促进转录的起始。 1 32~92 rpo D σ 催化中心：结合核苷酸底物，催化磷酸二酯键形成，与模板DNA结合。 1 1 155 160 rpo B rpo C β β 装配亚基：与启动子上游元件和活化因子结合. 2 40 rpo A α 功 能 亚基数目 相对分 子量(kD) 基因 亚基 大肠杆菌RNA聚合酶各亚基的性质与功能 2. 真核细胞RNA聚合酶 中等敏感 转录小分子RNA， 如tRNA、5S rRNA等 核质 聚合酶III 敏感 转录mRNA 核质 聚合酶II 不敏感 转录rRNA 核仁 聚合酶I 对抑制物α-鹅膏蕈碱敏感性 功 能 细胞 部位 RNA聚合酶种类 线粒体中的RNA聚合酶与原核生物相似。 转录可分三阶段：起始、延伸和终止。 真核生物中还需转录后加工过程。 1. 原核生物的转录过程 （1）转录起始 ① 启动子(promoter) 位于结构基因5端上游的一段DNA序列，可被RNA聚合酶识别并结合，以启动基因转录，又称启动基因。 TATAAT TTGACA 启动子区 结构基因 -10 Box -35 Box 5 3 ＋1 -10 -35 原核生物启动子特点： –10 Box：也称为Pribnow盒，一致序列为TATAAT，有利于转录时双链的解开。 –35 Box：一致序列为TTGACA，提供聚合酶结合时的识别为点。 ② RNA聚合酶与模板DNA的结合 开放式启动子复合物 (open promoter complex) DNA双链在-10 Box附近解开约14bp的区域，酶与模板形成紧密复合物。 封闭式启动子复合物 (closed promoter complex) 全酶的σ因子识别-35 Box，并与之结合。 ③ RNA合成的起始 RNA聚合酶 (RNA Pol) 起始位点(initiation site) 通常结合一嘌呤碱基 延伸位点(elongation site) 起始位点的嘌呤碱基与模板+1位碱基配对 延伸位点引入与模板＋2位碱基配对的第二个NTP，形成磷酸二酯键 新合成RNA链延伸约6~10碱基后，σ因子从全酶脱落 延伸阶段 在模板指导下依次引入NTP (2) 转录延伸 σ因子的脱落，促进了RNA合成速度： 约50核苷酸/秒.分子酶 Direction of transcription Rewinding Negative supercoils supercoils Positive RNA-DNA hybrid(~8bp) Active site NTP chanel Unwinding Coding strand Template strand 5 RNA 3 大肠杆菌RNA聚合酶催化 RNA聚合反应的起始与延伸 Transcription 大肠杆菌trp操纵子终止位点序列(富含GC的反向重复序列形成茎环结构促进RNA从模板上脱落) (3) 转录终止 ① 不依赖ρ因子的终止 ② 依赖ρ 因子的终止 ρ因子(ρ factor)：由50kD亚基组成的六聚体，是一种ATP依赖型解链酶，可解开RNA:DNA和RNA:RNA双链。 2. 真核生物基因转录 （1）真核生物启动子 真核生物包括三类启动子： 控制小分子RNA的转录 类型Ⅲ启动子 (class Ⅲ promoter) 控制mRNA的转录 类型Ⅱ启动子 (class Ⅱ promoter) 控制rRNA的转录 类型Ⅰ启动子 (class Ⅰ promoter) 真核生物启动子由转录因子识别。 转录因子(trans