guan-6-染色体工程课件.pptVIP

pYAC长约8kb，带有人工染色体所需的一切元件。当要用它进行克隆时，先用BamHI和SmaI对它进行双酶解，回收两个臂，然后平末端的外源大片段DNA就可以两个臂连接，形成真正意义上的人工染色体。 YAC是目前容量最大的载体，可插入100万碱基以上的DNA片段，既可以保证基因结构的完整性，又可以大大减少核基因库所需的克隆数目，从而使文库的操作难度减少。YAC既可以连很长的连续排列的DNA，又可以小到能够方便地通过亚克隆进行DNA序列分析研究，这种特性对于目前正在实施的各种基因组计划意义极大。 ?缺点：插入片段大，稳定性差；插入片段易缺失，使文库不完整；插入片段易重排，造成序列错误；文库中嵌合现象严重。 人工染色体的应用 1 物理图谱和定位克隆 2 基因功能鉴定和转基因研究 3 染色体结构与功能关系的研究 4 基因治疗 思考题 1 什麽是染色体工程？动物染色体工程主要包括哪些方面？ 2 动物染色体加倍技术有哪些？比较各自特点和适用对象。 3 何为人工染色体和主要构成元件？讨论其应用现状和发展前景。 参考书目 《细胞工程》 安利国著 科学出版社 《动物细胞工程原理与实践》 冯伯森等 科学出版社 《发育生物学》 黄秀英等 高等教育出版社 * 生物体的遗传信息主要集中在染色体上, 染色质是指细胞分裂间期细胞内由DNA，组蛋白，非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构 染色体指细胞有丝分裂或减数分裂过程中由染色质聚成的棒状结构。 每种生物所含染色体形态、结构和数目相对稳定 * anaphase * 减数分裂是生殖细胞成熟时特有的分裂方式。体现在它在染色质复制一次后，要经过2次分裂，结果子细胞的染色体数目比亲代细胞减少一半。 染色体组：一个配子的全部染色体（数目，形态结构和一定基因组成的染色体群） 整倍体：体细胞内含有完整的染色体组的类型 染色体组内个别染色体数目有增减，使细胞内的染色体数目不是基数的完整倍数。 多倍体：每个体细胞含有3个或更多染色体组的个体，3，4，5，6，8倍体 * * * 它对遗传学等生命科学基础理论研究，人工诱导多倍体的育种研究、人工诱导雌、雄核发育及性别控制等研究领域具有重要价值。 * 多倍体与二倍体相比： 形态巨大，代谢旺盛，糖，蛋白质及其他产物含量提高。 人工诱导改善动物经济性状 动物多倍体稀少原因：（1）远源杂交能力弱，难以形成杂种个体，加上缺乏染色体加倍的机会，即便形成杂种，也不能遗传下去。马2n＝64，驴2n＝62，杂交骡2n＝63 （2）可能与染色体性别决定有关。 * 辐射处理包括γ射线（通常用60Co或173Cs）、X射线和紫外光线。 γ射线和X射线具有较高的穿通能力，有利于处理大量精子，其主要作用可能是诱使染色体断裂，因而对精子的存活可能有一定影响。 紫外光的主要作用是诱使胸腺嘧啶二聚化，因此这一过程能在光作用下修补复活，但对较厚的、不透明的精细胞样品，失活的效果较差，不适易处理大体积精子。 雄核发育（androgenesis）是指因经过紫外线、X射线或Y射线处理的卵子与正常的精子受精，再在适当时间施以冷、热或高压等物理处理，使进入卵子内的精子染色体加倍，而发育成为完全为父本性状的二倍体。 雄核发育的个体的生存率非常低，这是由于精子基因型的纯合性、卵子由于照射的损伤和阻止第一次卵裂处理的损伤等原因造成的。 但是仍旧在遗传学基础理论和育种中都有一定的价值，利用雄核生殖的精子可用于冷冻基因库，保存种质资源对基因世代克隆系的建立，不同种间核质的杂种的产生和YY雄性引起的性别控制等也有特殊的意义。 历史 1911年，赫特威氏Hertwig就第一个成功地人工消除了精子染色体活性，并发现了“赫特威氏效应”。 ? 辐射剂量在极限以下，精子和受精胚胎均正常 辐射剂量渐增，胚胎存活率下降 继续增加辐射剂量，回复到正常卵裂 ，胚胎存活率提高。 雌核发育的关键问题 要达到实验性二倍体雌核发育目的，必须解决两个最主要的问题。 第一：人为地使精子的遗传物质失活 第二：阻止雌性个体染色体数目的减少 不同种类的物理辐射包括γ射线（通常用60Co或173Cs）、X射线诱使染色体断裂和紫外光线诱使胸腺嘧啶二聚化和化学药品的处理对精子遗传物质失活和显微手术直接除去受精卵雄性原核。 鉴定方法 鉴别雌核发育的个体，通常以颜色、形态以及生化等方面的指标为依据，也可通过细胞学的研究。 若是雌核发育，其囊胚细胞中只出现一套来自雌核的染色体，否则雌核和雄核染色体各占一半，得到的是杂交种。 用遗传标志的方法来鉴别雄核发育的二倍体化，即由第一次有丝分裂的阻碍，还是由保留极体而来。假如二倍体源自第一次有丝分裂的