细胞工程-第八章 植物种质保存课件.pptVIP

第八章 植物种质保存 第一节 种质资源保存类型 一、概念种质：是决定生物遗传性状，并将遗传信 息从亲代传递给子代的遗传物质。种质库：是指以种为单位的群体内的全部 遗传物质，它有许多个体的不同 基因所组成。又称基因库。种质资源：具有种质并能繁殖的生物体统 称为种质资源或遗传资源。 二、种质保存的意义 随着经济发展，地球不断开发及生态环境破坏，每年都有多个物种消失或濒临灭绝。各种植物，包括栽培种、野生种甚至杂草，都具有各自独特的优良基因，是植物品种改良乃至农业可持续发展的基础。它们是经过长期进化而来，一旦失去不会再来。因此，世界各国都很重视植物种质资源的收集与保存的研究。 三、种质保存的方法 按保存的地理位置分为原地保存和异地保存 。原地保存是在原来的生态环境条件下 , 就地保存 , 自我繁殖品种资源 , 一般野生品种资源采用这种方式保存 , 如建立自然保护区 , 天然公园等；异地保存是将种子或植株保存于该品种资源原产地以外的地区 , 这种保存可采用植物园、种质园、种质库等形式或采用试管保存形式。 按照保存的具体方法 , 品种资源的保存可分为种植保存、贮藏保存、试管保存、基因文库保存。  1、 种植保存 为了保持品种资源的种子或无性繁殖器官的生活力 , 并不断补充其数量 , 品种资源材抖须每隔一定时间播种一次 , 即种植保存。 在种植保存时 , 种植条件尽可能与原产地相似 , 以减少由于生态条件的改变而引起的变异和自然选择的影响。在种植过程中应尽可能避免或减少天然杂交和人为混杂。播种和收获时取样要有代表性以免因抽样而造成遗传漂移。总之要尽可能地保持原品种或类型的遗传特点和群体结构。此外 , 对来自自然条件悬殊地区的品种资源 , 可分别在不同生态地点异地种植保存。  2、 贮藏保存 贮藏保存就是用控制贮藏条件 ( 主要是温度和湿度 ) 的方法 , 来保持品种资源种子的生活力。 长期贮藏保存种子生活力的技术关键是低温和干燥 , 通过控制种子周围环境中的温湿度 , 迫使种子处于代谢作用的最低限度。 贮藏保存种质资源采用种质库 , 种质库分三种：长期库、中期库和短期库。  3、基因文库保存 利用DNA重组技术，将种质材料的总DNA或染色体所有片断随机连接到载体上，然后转移到寄主细胞中，通过细胞增殖，构成各个DNA片断的克隆系。 第二节 试管保存 一、常温下试管保存 可利用试管苗继代培养保存，但需要经常更换培养基。 二、常温抑制生长保存 为了延缓继代时间，可在培养基中添加长抑制剂或提高渗透压等。如脱落酸(ABA)、矮壮素（2-氯乙基三甲基氯化按，简称CCC）、二甲氨基琥珀酸酰胺（简称B9）、多效唑（PP333）等都是生长抑制物质，培养基中添加一定量可以延缓生长。一般情况下几个月继代一次，而添加这些物质后，可达到一年甚至以上。  提高培养基渗透压也可以延缓生长。可用蔗糖或甘露醇，浓度分别调到10%左右和4%—6%。  三、中低温调控生长保存 在试管苗继代培养过程，适当降低温度，也能延缓生长，延长继代时间。一般植物可调到1—9℃，热带、亚热带植物调至10—20℃。  四、常温抑制生长保存与中低温调控生长保存相结合 培养基中添加生长抑制剂或提高渗透压，培养温度降低，使继代时间延长。 第三节 超低温保存Cryopreservation 一、超低温保存的基本原理和主要环节 在液氮中（-196℃），几乎所有的细胞代谢活动停止，仅保存细胞的活力和形态发生的潜力。当解冻后，能够恢复再生能力。 超低温保存比较复杂，哪一步操作不当，都会使细胞受伤害，失去再生能力。 注：超低温通常指低于一 80 ℃的低温，保存介质或容器有干冰(一 79℃)、超低温冰箱(-80-150 ℃)、液氮(-196℃)和液氮蒸气相(-140℃)等，其中液氮最常用。 二、超低温保存技术1、保存材料的选择 2、冷冻前材料预处理 3、添加冷冻防护剂 4、材料冷冻的方法（预冷） 5、材料保存6、保存材料解冻7、保存材料复苏培养 1、保存材料的选择  花粉、茎尖分生组织、芽、种胚、小植株、愈伤组织、体细胞胚等均可以作为保存材料。 2、冷冻前材料预处理 为了使保存材料适应超低温条件，必须进行预处理。 预处理方法：将保存材料放在高糖浓度、添加二甲基亚砜（DMSO）、脯氨酸，在接近零度下培养数日。  3、添加冷冻