输血前相容性检测阎课件.pptVIP

输血前相容性检测 教学目的和要求 掌握盐水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、方法及意义。 熟悉微柱凝胶法原理、方法。 了解酶法、白蛋白介质法、Liss法的原理和方法。? 熟悉ABO/Rh血型鉴定方法及影响因素 熟悉抗体筛选原理和意义 熟悉交叉配血方法及意义 了解抗体鉴定原理和意义 血型鉴定 抗体筛选及鉴定 交叉配血 红细胞抗原抗体检测技术 红细胞抗原抗体检测技术应用 微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验 酶介质凝集试验 盐水介质凝集试验 抗人球蛋白试验 增强技术 盐水介质凝集试验 悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。 主要检测IgM类抗体（ABO系统、抗E）。 抗A抗B特异性IgG类抗体有时可直接凝集悬浮于盐水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。 盐水介质凝集试验 方法：玻片法-便于显微镜观察结果 试管法-适用于不同温度、便于洗涤 反应温度：4～22℃ 临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37℃也有活性的抗体有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，37℃无活性者临床意义不大。 试验记录 4+（++++）：一个大凝集块，背景透明，无游离细胞 3+（+++）：数个大凝集块，背景透明，无游离细胞 2+（++）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离细胞 1+（+）：细小的凝集块，背景浑浊 W+（±）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果 0（-）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态 PH：部分溶血 H：完全溶血 Weak reactions often difficult to interpret. Can also be downgraded due to shaking the completed test. Conventional Testing. 盐水介质凝集试验 ◆结果分析：阳性-凝集或溶血 阴性-无凝集或溶血 先观察有无溶血、再观察有无凝集 ◆注意事项：细胞浓度2～5%（严格按说明 书操作）、血清与细胞比例、反应温 度、弱凝集分析 ◆优点：简便、快捷、直观。 ◆缺点：不能发现不完全抗体。 微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验 酶介质凝集试验 盐水介质凝集试验 抗人球蛋白试验 增强技术 抗人球蛋白试验 抗球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立的，又称Coombs试验。抗球蛋白试验的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。 分为直接抗球蛋白试验（DAT）和间接抗球蛋白试验（IAT）。 抗人球蛋白试验原理 IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗-IgG后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。 补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球蛋白试验。 抗人球蛋白试剂 多特异性抗球蛋白试剂：应含有抗IgG和抗-C3d。 单特异性抗球蛋白试剂：抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗C3、C4的片段。 直接抗人球蛋白试验 DAT是用来检测体内红细胞致敏情况，尤其是IgG和C3d包被的红细胞。 用于： HDN和自身免疫溶血性贫血的诊断 红细胞被药物抗体致敏的检查 急性和迟发性溶血性输血反应的检查 间接抗人球蛋白试验 用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。 用不完全抗体测定红细胞血型，如Rh血型。 交叉配血。 结果分析-假阳性 ●用免疫兔或羊制备的抗人球蛋白含有种间抗体。 ●红细胞在用盐水洗涤时已有凝集。 ● IAT试验中所用红细胞本身DAT阳性。 ●不抗凝标本在冷环境里经过一段时间的保存后，自身冷抗体发生作用，激活补体，补体成分结合在红细胞上，用多特异性抗球蛋白试剂会发生假阳性。 ●离心过度，红细胞压积过紧，不易充分摇散 结果分析-假阴性 致敏后的红细胞洗涤不充分,残留的球蛋白中和了试剂中的抗球蛋白，造成假阴性。 操作过程不连续，时间过长，结合在红细胞上的抗体解离。 红细胞、血清和抗人球蛋白试剂保存不当都可能发生活性减弱或丧失。 红细胞过多，反应减弱；红细胞过少，看结果不准确，都影响结果。 试剂中抗人球蛋白浓度过大，有前带现象。 孵育时间和温度不当，会使反应结果减弱或变为假阴性。观察结果时过度摇动试管，摇散细小凝块。 注意事项 每次试验要设有阴性和阳性对照。 阴性结果要加入一滴IgG致敏红细胞 实验器材清洁。 注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条件。 严格按照实验方法操作。 排除自身抗体干扰。 微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验 酶介质凝集试验 盐水介质凝集试验 抗人