非小细胞肺癌文献一篇.pptVIP

主要内容 实验流程 样品处理 LC/MS分析 MS/MS分析 MS数据分析 质量控制 统计分析 统计分析 非参数秩和检验:评估肿瘤组织与两种正常组织中检测的二肽水平有无明显变化 结果:没有相关的二肽有显著性差别 二项分布:在检测的334种二肽中有105种有统计学意义 因3个样本来自同一个体，故需分析样本大小对代谢物检测结果的影响 主要内容 实验结果 肺癌相关二肽数据库产生 肺癌组织中二肽的识别 MS/MS二肽谱图 不同分析条件下二肽的识别 肺癌组织中二肽的靶标分析 结论验证 研究意义及不足 肺癌相关二肽数据库 标准品二肽合成:基于组合合成法的阵列及包含组氨酸的二肽，不能合成的二肽通过Aanspec Int公司获得 混合物配置:将7-30毫微升具有相同C羧基端的18种二肽混合并用50%乙腈和水稀释成10 μM，丹酰衍生化后，采用LC方法B及MS全谱扫描 肺癌相关二肽数据库 氨基酸是生物样本中唯一分析物，故用氨基酸作为标准品 氨基酸保留时间的多项对齐是对齐二肽保留时间最好的方法 肺癌组织中二肽的识别 361种二肽中只有161种有独特的化学分子式，只有17种是单一的异构体(AA) 同分异构体二肽的识别需要仔细比较其滞留特性 合并肿瘤样本再分析得到279种二肽，其中234种二肽的质量精度＜5ppm，45种＜10ppm，将279种二肽保留时间与数据库比对，大部分二肽保留时间在0.1min内，但有精氨酸的二肽标准品和样品有明显不同 MS/MS二肽谱图 丹酰化二肽的MS/MS谱图通常不提供信息，而主要以丹酰离子为主 由丹酰分离出来的C12H12N阳离子在大部分丹酰化二肽谱图中产生基峰，m/z为170.0964 95%测量值与真实值相比降低(精度误差小于13ppm) 根据测量值得到的化学分子式精度误差都在13ppm以内 MS/MS二肽谱图 MS/MS二肽谱图 其他丹酰特征的离子还包括: m/z 234.059 (C12H12NSO2)在单一带电离子中普遍存在且变异较大； m/z 252.069 (C12H14NSO3) 在含氧二肽中普遍存在； m/z 186.092 (C12H12NO)离子也很普遍 MS/MS二肽谱图 丹酰化二肽分裂处(经典离子) MS/MS二肽谱图 丹酰化二肽分裂特征碎片 MS/MS二肽谱图 MS/MS二肽谱图其他明显特征： 由氨基酸I/L/V/A组成的二肽在位1或位2有经典的I离子 色氨酸的I离子会发生中性分子的丧失，产生m/z144和130 的特征性碎片 二肽通过中性丢失(焦谷氨酸盐)使c离子增加 带有氨基酸R、K、H的二肽有复杂的特征 二肽XR、RX使m/z为156/157碎片增多 MS/MS二肽谱图 赖氨酸二肽经常带双电荷，m/z317碎片显著，还有m/z84经典碎片 组氨酸二肽也经常带双电荷，I1和I2碎片离子较多 HX双电荷二肽与NX、MX有相同的m/z261的碎片离子 蛋氨酸二肽在m/z337发生多次分裂，产生不同碎片离子 不同分析条件下二肽的识别 氨基酸作为内标可以使来自不同实验室的代谢组数据具有可比性 本地散点平滑估计(LOESS)是最好的校准二肽保留时间的方法 肺癌组织中二肽的靶标分析 采用最小二乘法比较肿瘤组织与正常组织中丰度变化明显的二肽 有257种二肽至少在一种组织中被检测到，其中253种在肿瘤组织中检测到 在肿瘤组织中检测到90种二肽丰度与正常组织相比有明显的增加(倍数＞2,P＜0.05) 成倍增加的倍数在2.1-23.1不等，其中有58种＞5倍，11种＞10倍 结论验证 验证队列：10组配对的肿瘤组织-正常组织 (没有分析与癌组织相邻的正常组织) 单侧秩和检验分析结果： 145种二肽至少在一种组织中检测到，其中22种二肽在肿瘤组织中明显升高(P=8×10^-10) 结论验证 其他分析： 邻近正常组织中179种二肽被检测到，但只有3种与相应的正常组织的二肽相比有统计学意义 比较肿瘤组织和正常组织的19种氨基酸，在肿瘤组织中只有很小的增加(倍数在1.1-2.5) 比较6个肝癌患者的肿瘤组织和正常组织，只有3种二肽的丰度有不同 研究意义及不足 关于正常状态和疾病状态下的二肽丰富度比较的研究很少 氨基酸作为内标可以比较不同实验室得到的数据结果 与先前得到的220种二肽一起，组成了一个具有581种丹酰化代谢物的数据库 肺癌患者二肽水平改变的生理意义尚不能解释说明 THANK YOU * Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Methods