基因工程第三章 从活细胞制备和纯化DNA.pptVIP

3.1 全细胞DNA的制备 由于课时有限，仅以细菌DNA的制备为例了解细胞总DNA的制备原理和过程。 从细菌培养液中提取全细胞DNA的方法分为 以下四步: 细菌的培养和收集 破碎细菌细胞，释放出内含物 去除DNA以外的其它成分（纯化） 浓缩DNA溶液 3.1.1 细菌的培养和收获 不确定成分基质：例如 LB，我们并不十分清楚地知道它含有什么物质以及具体的含量。这是因为它的两个组成成分蛋白胨（tryptone）和酵母提取物（yeastextract）是非常复杂的化合物的混合体。 蛋白胨主要提供氨基酸和小的多肽，而酵母提取物（干物质，含少量分离的酵母细胞）则供给氮、糖、以及有机和无机营养物质。 完全基质LB不需加入任何其它物质，可用来培养许多细菌种类。 使用LB基质，在370C和150-250转/分的摇动速度下，大肠杆菌20分钟就可分裂一次，直到每毫升的细胞数达到2-3x109这个最大密度为止（ 在600纳米波长下可以通过测量培养液的光密度来跟踪细菌的生长情况。在此波长下，一个光密度单位（OD）相当于每毫升含有0.8x109个细胞) 在细胞被溶解后，最后一步就是必须将不溶的细胞碎片除去，例如还没有完全溶解的细胞壁。通过离心可以将它们除去。 这一步完成后，细胞提取物呈现出透明的溶液。 细菌细胞提取液中除DNA外，还有大量的蛋白质和RN