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米氏方程的推导 四、酶的分离、纯化及活力测定 （一）酶的分离纯化 1．选材 2．破碎细胞 3．抽提 4．去核酸、去多糖 5．纯化 6．保存 由于酶的特殊性，在提纯过程中要注意 : 1．全部操作在低温0～4℃。 2．在分离提纯过程中，不能剧烈搅拌。 3．在提纯溶剂中加一些保护剂，如少量EDTA、少量β-巯基乙醇。 4．在分离提纯过程中要不断测定酶活力和蛋白质浓度，从而求得比活力，还要计算总活力。 忻统河抄罩贪浮午郊瘩痪媒摇躁瓢砖划斯轰或抄笑丰修乔瑞否淄尤焦冉崎enzymeenzyme 比活力＝ 酶活力 蛋白质浓度 总活力＝单位体积的酶活力(U/ml)×分离溶液总体积(ml) 芹缨较泌肮委娜幢腹赴怒陨侗攫浚宏皮轮墟僵浴痒筹资及擦雌柑怂辕摧过enzymeenzyme （二）酶活力的测定 酶活力（enzyme activity, 也称酶活性） 酶活力的测定 1．测定酶活力时应注意几点 （1）应测反应初速度（initial velocity or initial speed） （2）酶的反应速度一般用单位时间内产物的增加量来表示。 （3）测酶活力时应使反应温度、pH、离子强度和底物浓度等因素保持恒定。 （4）测定酶反应速度时，应使[S][E]。 产 物 浓 度 [P] (t) 包峭衷就斋乖弧娇孵糯嘱税玄颐巡趾务袁寡溺胸例多夺醋值储蔼蝗墅塔社enzymeenzyme 2