12 蛋白质复性课件.ppt

* 白细胞介素11(IL-11)一种促血小板生长因子，可直接刺激造血干细胞和巨核祖细胞的增殖，诱导巨核细胞的成熟分化，增加体内血小板的生成，用于实体瘤、非髓性白血病化疗后Ⅲ、Ⅳ度血小板减少症的治疗 * 肝素首先从肝脏发现而得名，天然操作于肥大细胞，现在主要从牛肺或猪小肠黏膜提取。肝素是一种由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂。制剂分子量在1200～40000，抗血栓与抗凝血活性与分子量大小有关。肝素具有强酸性，并高度带负电荷目前最熱門的研究是將癌細胞周圍的血管以藥物阻斷, 使生長快..速的癌細胞無法獲得營養與氧氣, 將癌細胞餓死, 這方面的藥物有許多種, Angiostatin是人體中就有的, 由Harvard的Dr. Folkman發現, 同群研究小組還發現另外一種稱為Endostatin的抗癌物, 兩者都是新生血管的抑制物, 所以也是利用餓死癌細胞的方法來抗癌, 而且非常安全無副作用, 因為它們幾乎除了癌細胞以外, 不會對正常細胞發生攻擊, 可以說是新一代癌症導彈, 目前這兩種新藥已經進行動物實驗, 成效良好,但是距離完成人體試驗上市可能還要等上幾年, 但是這結果絕對是值得等待的 第十章 蛋白质复性refolding 提纲 变性与复性 包涵体的形成和性质 包涵体的纯化和溶解 蛋白质的复性 蛋白质体外复性的常用方法 1. 变性unfolding与复性refolding 变性过程总伴随着蛋白质的物理、化学、生物学性质的变化，如溶解度改变、体积变大、黏度增加、扩散系数降低、生物活性降低或消失等。 蛋白质变性时肽链伸展而失去特定的空间结构，这一过程称为肽链的伸展或去折叠。随着这一过程的进行，整个分子也由天然蛋白质紧密的、球状或近球状结构伸展为松散的无一定空间结构的链状分子。 许多变性蛋白质在去除变性因素后，可自发地恢复它原来的空间结构和生物活性，这称为变性蛋白质的再折叠或复性。（p384） 复性有关理论 蛋白质从去折叠状态向折叠状态即天然状态转变的过程中，必须经历一个高自由能的过渡态。 蛋白质复性过程中能量变化示意图 复性有关理论 在这个过渡态中蛋白质可有多种构象形式，而天然状态蛋白质可能有一种或有限的几种构象状态存在。 蛋白质的再折叠是依据最小能量原则进行的，假设蛋白质的天然构象是能量最小的构象，变性态蛋白质分子会自发的向这个最小能量状态转变。这就是“热力学假说”。 该理论认为：蛋白质天然构象形成具有协同性，其能量差别足以区别天然构象和其它构象。大部分蛋白质的天然构象应是能量最小构象。 复性有关理论 大量研究还发现，许多蛋白质在体外的变性复性过程并非完全可逆，且体外复性速度远比体内低，多肽链折叠过程中受到许多因素的限制，如S-S键重排和脯氨酰顺反异构等都是折叠反应的限速步骤，实际多肽链在折叠过程受到动力学控制。 蛋白质在折叠过程中会有两种途径相互竞争，一种是正确折叠形成天然构象的途径，另一种是错误折叠成稳定的非天然构象的途径。蛋白质多肽链的正确折叠是一些因素在折叠动力学过程中起到控制作用。 复性有关理论 “动力学假说”与“热力学假说”并不互相否定，而是互相补充与修正，对不同蛋白质而言，二者在蛋白质多肽链折叠过程中所起的作用大小不同，各有特点。总体上，蛋白质的折叠遵循“热力学假说”，从高能态向低能态转变的过程又受动力学控制。一些小分子单结构域蛋白质的折叠过程相对简单些；热力学控制下能容易地进行可逆的变性、复性；结构比较复杂的蛋白质，特别是涉及S-S键重排，脯氨酰顺反异构限速步骤的折叠反应，总体上受热力学控制，但折叠途径即动力学控制比较重要。 复性有关理论 两个理论都认同：蛋白质的折叠是蛋白质自身分子内作用的结果，是由于暴露在溶液中的疏水侧链的疏水作用而互相靠近，形成了具有特定三维空间结构的蛋白质分子。 按拓扑学观点认为：虽然蛋白质内部基团相互作用复杂，使得不同蛋白质的折叠复性过程不相同，但不同蛋白质多肽链穿越空间的形式可能会是相同或类似。实验中也发现，蛋白质拓扑结构的氨基酸序列不改变对蛋白质的折叠速度等参数影响很很少。因此，该理论认为，蛋白质的折叠过程的许多参数及其折