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HIF—1α与口腔白斑癌变的相关性研究 　　[摘要] 目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在口腔白斑血管生成中的作用及其与口腔白斑术后复发的相关性与影响因素。 方法 免疫组化法检测口腔鳞状细胞癌、口腔白斑及口腔正常黏膜中HIF-1α的表达情况，荧光定量PCR法检测microRNA表达。 结果 与口腔正常黏膜相比，口腔白斑microRNA相对表达量显著增加，而口腔鳞癌与口腔白斑相比，microRNA相对表达量显著增加，两两比较差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 HIF-1α在口腔白斑及白斑癌组织中过度表达，其可作为判断口腔黏膜组织发生白斑病变及白斑癌变的标志物之一。 　　[关键词] 缺氧诱导因子-1α；口腔白斑；血管生成 　　[中图分类号] R739.8 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）05-0028-03 　　我国口腔颌面部鳞状细胞癌多发于40～60岁的成年人，早期发现是目前预防与治疗鳞癌的最佳方法，通过HIF-1α与口腔白斑癌变的相关性研究可以早期判断白斑的性质。口腔黏膜白斑是口腔黏膜病中常见的一种疾病，国内外一直有大量学者在研究两者的关系，探讨HIF-1α在口腔黏膜白斑可能的相关发病机制，为口腔黏膜白斑的诊断、治疗和预后判断提供实验依据[1]。本研究将采用免疫组化法测定口腔白斑组织中HIF-1α表达情况，并对其与口腔白斑发生及发展相关性进行分析，旨在为临床口腔白斑的治疗提供新的思路。 　　1 资料与方法 　　1.1 临床资料 　　选择2005～2012年从本院病理科选取的口腔鳞状细胞癌、口腔白斑及口腔正常黏膜石蜡切片标本各15例，三组病理组织学标本结果均由两位资深的病理分析医师共同确认。每个样本均采用连续切片法，样本的厚度为4 μm，具体资料见表1。 　　表1 实验样本基本资料 　　1.2 方法 　　1.2.1 microRNA含量的测定 采用RT-PCR（购于美国ADI公司）测定各组组织中microRNA含量，设计针对人microRNA的PCR探针序列以及荧光检测引物，选择人GAPDH（由美国BD公司提供）作为测试的内参物，并采用Trizol试剂盒（美国Invitrogen公司）提取RNA，荧光定量PCR实验严格按照试剂盒操作说明进行。microRNA相对表达量=目的基因/内参基因。 　　1.2.2 免疫组化法测定 采用免疫荧光组化法检测两组HIF-1α、VEGF表达情况，兔抗人VEGF多克隆抗体购于福州迈新生物技术公司，HIF-1α鼠抗人多克隆抗体购于北京金桥生物技术公司。HIF-1α采用EDTA热修复处理20 min，VEGF采用柠檬酸缓冲液于高压锅中热修复处理2 min后采用冷水洗涤，并采用PBS缓冲液对样品进行冲洗，经苏木精复染后采用乙醇对样本脱水并制成中性树胶封片，并与已知的阳性切片进行对比，阴性对照采用PBS缓冲液替代一抗的样本为参照。 　　1.3 免疫组化结果判断 　　①HIF-1α阳性表达为棕黄色颗粒见于细胞核内，VEGF阳性表达为棕黄色颗粒见于细胞质及细胞核内。②在倍数为100的显微镜下观察细胞着色情况，根据着色程度由轻至重可分别计为0、1、2、3分。随机选取5个视野点，采用倍数为400的显微镜进行观察，每个视野进行细胞计数，以500个细胞作为一组计算单位，细胞阳性百分率：1分为50%。积分计算：①与②计算所得的分值相乘。0分为阴性“-”，1～3分为弱阳性“+”，4～6分为中度阳性“++”，7～9分为强阳性“+++”[3]。 　　1.4 统计学分析 　　应用SPSS17.0软件进行统计学分析，计数资料用相对数表示，组间比较采用χ2检验，HIF-1α与VEGF相关性采用Spearman相关分析，P 0.05表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 microRNA的相对表达量分析 　　与口腔正常黏膜相比，口腔白斑microRNA相对表达量显著增加，而口腔鳞癌与口腔白斑相比，microRNA相对表达量显著增加，两两比较差异有统计学意义（P 0.05）。见表2。 　　2.2 HIF-1α与VEGF阳性表达情况 　　正常黏膜、口腔白斑、口腔鳞癌中HIF-1α阳性表达率分别为0、73.30%、100.00%，而正常黏膜、口腔白斑、口腔鳞癌中VEGF阳性表达率分别为0、66.70%、100.00%。见表3。 　　表3 HIF-1α与VEGF阳性表达情况 　　注：与对正常黏膜相比，口腔白斑χ2=5.487，aP 0.05；与口腔白斑相比，χ2=4.212，bP 0.05 　　2.3 microRNA与HIF-1α、VEGF相关性分析 　　经相关性分析可知，microRNA与HIF-1α表达呈负相关（