聚丙酰胺凝胶电泳法分离丙种球蛋白课件.pptVIP

聚丙酰胺凝胶电泳法分离丙球蛋白 樊贝贝 第二组 目录 简介 实训原理 材料与器材 操作步骤 注意事项 简介 一、电泳法（如：聚丙烯酰胺凝胶电泳) 定义：利用溶液中带有不同量的电荷的阳离子或阴离子，在外加电场中以不同的迁移速度向电极移动，而达到分离目的的分析方法。 作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。 作用原理 ：聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。 形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。 聚丙烯酰氨凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。 聚丙烯酰胺凝胶的特性 凝胶透明，有弹性，机械性能好； 化学性能稳定，与被分离物不起化学反应； 对pH和温度变化较稳定,几乎无吸附和电渗作用； 样品用量少，灵敏度可达10-6g;