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组织切片技术姓名：许莎 班级：生技121 学号织切片技术是研究生物组织或细胞形态和结构的重要技术，对于促进细胞生物学和遗传学等研究的发展起着重要作用。最早的制片技术是徒手切片技术，以后发展了利用石蜡进行包埋和切片的制片技术，即石蜡切片技术，该技术由于成本低，操作简单，目前仍在应用，该技术被越来越多的研究工作者应用于发育学、植物细胞学、胚胎学、解剖学等研究领域。1组织切片技术原理1.1原理组织切片技术是研究组织形态学最常用的一项基本技术，在制作胚胎或组织切片时，由于细胞或组织是柔软的或局部的软硬不均，这样制作厚薄均匀的切片很困难。为了能清晰地观察到组织结构及细胞形态，必须先经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质，使组织变硬然后利用切片机将组织切成薄片。根据所用支持剂的种类不同，主要分为石蜡切片、冰冻切片、振动切片、火棉胶切片、塑料切片、碳蜡切片等。1.2分类1.2.1石蜡切片该技术是最重要、最常用的组织切片技术之一，起始于18世纪。此法是用石蜡作为包埋剂，将材料经过固定、脱水、透明后包埋在石蜡中，然后连同石蜡用切片机一同进行切片。石蜡切片的主要优点是不仅可以把材料制成薄的切片，而且还能制成连续切片，这是其他制片技术难以做到的。它的缺点是操作步骤比较复杂，而且材料在脱水、透明过程中会收缩、变硬、变脆，以致不易切片[1]。1.2.2冰冻切片冰冻切片是利用干冰或液氮等速冻剂使组织迅速冷冻硬化，将组织在冷冻状态下直接用切片机切片的一项技术。它实际上是以水为包埋剂，将组织进行冰冻至坚硬后切片的。由于此法不需要经过各级乙醇的脱水、二甲苯的透明和浸蜡等步骤，因而较适合子脂肪、神经组织和一些组织化学的制片，并作为快速切片的方法应用在临床诊断冰冻切片是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。此种切片的优点是能较好的保存组织的RNA稳定性、较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，缺点是需要较高的设备要求;切片较厚，导致组织结构显示欠佳;通常不能进行连续切片。其主要操作技术和方法与石蜡切片过程和类似。1.2.3振动切片是用振动切片机把新鲜的组织切成厚20-100pm的切片。此类切片的优缺点类似于冰冻切片。通常在切片后进行免疫染色然后再进行电镜切片,以此来弥补结构显示不清的不足。振动切片机主要用于新鲜或经过固定的动、植物标本的制片，切片时组织标本不需冰冻或包埋。因此.样品片既避免了冰晶破坏，又能保持其活性和细胞良好形态为免疫细胞化学研究以及脊髓和脑薄片的神经生物学研究提供了良好条件。振动式切片机可以对不同的材料进行切片，在应用范围上补充了使用传统切片机的不足，是当代电镜、解剖、组胚、生理、医院化工等实验系统最理想的快速制样切片仪器。1.2.4火棉胶切片是以火棉胶为包埋剂浸入包埋组织。优点是可以切较硬的组织，缺点是操作比较麻烦费时,切片较厚,不能连续切片。1.2.5塑料切片用干硬度大的组织标本的包埋。由于塑料包埋组织细胞收缩程度小，切片薄，有利于组织细胞细微结构的观察，加之新型塑料包埋剂的出现和聚合方法的改进使塑料包埋技术得到了更为广泛的应用。塑料包埋使用的包埋剂是各种树脂，未聚合的树脂为勤稠的液体.通过标本组织块的没润，树脂可渗透到组织间隙中。自发或在催化剂和加速剂的作用下，发生分子回的连接形成支架，支撑组织细胞结构，聚合完成后形成固体硬块。其优点是可以切出薄至0.5-2nm的切片，适用于同时作光镜和电镜检测。缺点是处理程序繁多,抗原活性易丢失。1.2.6碳蜡切片以碳蜡为包埋剂，优点是组织固定水洗后不需脱水透明,可以直接浸碳蜡包埋,切片方法于石蜡切片相同，缺点是夏季温度较高时切片困难。1.3制备方法以石蜡切片为例，介绍切片标本的制备方法。1.取材：根据科研和教学目的选择新鲜材料，然后进行适当的切取、分割。样品块要尽量小，以便于下一步固定。2.固定：将选取的新鲜材料立即投人到固定液中，迅速杀死细胞以保持组织及细胞的原有结构。一般固定液的最少用量为所固定材料总体积的20倍。固定液的选择视材料的性质及制片的目的而定，一般要求尽快杀死并固定细胞和组织。石蜡切片常用的固定液有FAA固定液、卡诺固定液，此外，还有多聚甲醛、戊二醛、乙醇、乙酸等。3.洗涤：材料固定后，用洗涤剂将材料中的固定液洗掉，以便进行切片的染色或制片，常用的洗涤剂有水或乙醇。 4.脱水：因为固定和洗涤后的材料含有大量的水分，而水和透明剂、包埋剂(石蜡)不相溶，所以必须经过脱水逐步、彻底除去材料中的水分，才能进行透明和包埋。常用的脱水剂是乙醇，另外还有乙醇、正丁醇、丙酮、环氧丙烷等。脱水过程应由低浓度到高浓度逐级进行，不可太快。否则会使细胞收缩或材料损坏。5.透明：透明是脱水与浸蜡、脱水与封藏之间的桥梁。材料经脱水后，组织内部已没有水分，但脱水剂