流动细胞分析仪BD法讲述.ppt

BD流动细胞分析仪 汇报人： 学号： 环境微生物新技术 目录 流式细胞仪的概念 工作原理 应用领域 基本机构 变流式细胞术（Flow?Cytometry?，FCM）是一种对处在液流中的细胞或其它生物微粒（如细菌）逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。?流式细胞仪是指：使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号，对信号进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。 简言之，流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质，如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等进行快速测量并可分类收集的高技术。 流式细胞仪实物 BD-Calibur BD FACSVantage 流式细胞仪是一种特殊的显微镜 流式细胞仪与显微镜的具体区别 流式细胞仪检测的细胞特性 流式细胞仪的基本结构： （1）液流系统 （2）光学系统 （3）数据处理系统 （1）液流系统 液流系统示意图 （2）光学系统 光学系统示意图 （3）数据处理系统 待测样本的细胞悬液，在鞘液的包围和约束下，细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出，形成细胞液柱。 当液柱通过检测区，在入射的激光束照射下产生前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC），它们分别反映细胞大小和颗粒度，根据这些特性可以将细胞分类。 经一种或几种特殊荧光标记的样本，在激光束的激发下所产生的特定荧光，可被光学系统检测并输送到计算机进行分析，得到细胞相应的各种特性。 采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率； 利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏性和特异性； 用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。 基本工作原理 基本过程 流式细胞仪的测量对象 （1）大小 ：悬浮在溶液中的相互离散颗粒 大小范围：0.2uM-300uM （2）对象类型 细胞类型：①高等真核细胞； ②酵母； ③细菌； ④多细胞的聚集体，如胰岛等 非生命颗粒： 细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等