第07章放射免疫试验讲述.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * 二、分离技术 固相吸附分离法 固相材料 捕获抗体将结合标记物捕获于固相材料表面，而游离标记物分布于液相中，经洗涤去除液相中的游离标记物。 固相吸附技术 固相吸附技术 包被 Coating 将捕获抗体吸附于固相材料表面的过程 封闭 blocking 用高溶度蛋白溶液封闭空白结合位点 数据处理（实例） 图：标准曲线 第三节 两种方法的比较 RIA IRMA RIA IRMA 放射免疫分析 液相状态的抗原与抗体反应 免疫放射分析 固相表面与液相状态之间的抗原抗体反应 抗体固相化对抗体结构和功能的影响 第四节 临床应用 历史地位 方法建立 20世纪60年代 快速发展 20世纪80年代～90年代 临床应用 体内激素水平 病原体抗原或抗体 肿瘤标志物 药物测定 临床应用 现存检测项目 反三碘甲状腺原氨酸（分子量651Da）、胃泌素（分子量2098Da）、醛固酮（分子量364Da）、血管紧张素-I（分子量1200Da）和血管紧张素-Ⅱ（分子量1046Da） 第五节 关键因素 在放射免疫试验中被测物质浓度是根据标准曲线计算得来的。标准曲线的精确度直接影响测定结果的精确度。获得准确测定结果不仅需要高质量的检测试剂，同时也需要尽可能地从实验过程中把关，需要严格和精确的操作。 关键因素 试剂盒质量 操作过程 测量过程 曲线拟合 关键因素 试剂盒 标准品 抗体 标记物 本章小结（1） 放射免疫分析以标记抗原为特点，为竞争性免疫分析模式，基于标记抗原和非标记抗原对同一抗体有相同亲合力，常采用PEG-第二抗体对B或F进行分离。放射免疫分析多用于小分子半抗原（甾体激素）的定量分析。 本章小结（2） 免疫放射分析以标记抗体为特点，为非竞争性免疫分析模式，以过量标记抗体与待测抗原进行非竞争性免疫结合反应，采用固相免疫吸附方式对B或F进行分离；免疫放射分析以双位点（双抗体夹心）法较为常用，适用于大分子蛋白质（多肽）定量分析。 * * * * * * * * * * * * * * 第一章 血液标本采集与处理 临床免疫学检验技术 第七章 放射免疫试验 李会强 引言 放射免疫试验以放射性核素为特征，通过测定放射性强度评估抗原-抗体反应的强度，从而实现对待测物质的定量（或定性）分析。放射免疫试验将放射性核素的高灵敏性与抗原-抗体间的高特异性结合于一体，具有较高的分析敏感性和分析特异性。 引言 放射免疫试验创立了两种重要标记免疫分析模式即竞争性免疫分析（放射免疫分析方法）和非竞争性免疫分析（免疫放射分析方法），同时，也创立了固相吸附分离方法，以及剂量-反应曲线的数学处理模型，为酶免疫试验和发光免疫试验奠定理论和实践基础。 本章目录 第一节 放射免疫分析方法 第二节 免疫放射分析方法 第三节 两种方法比较 第四节 临床应用 第五节 关键因素 重点提示 放射免疫分析方法（原理） 免疫放射分析方法（原理） 第一节 放射免疫分析方法 相关知识 放射免疫分析方法 radioimmunoassay, RIA； 首个用于超微量物质定量的标记免疫分析技术； 发明人： Yalow and Berson 1959 一、分析原理 放射免疫分析方法 竞争性免疫分析模式 标记抗原和待检抗原同质 分析体系中的抗体限量 分析原理 图：放射免疫分析方法原理示意图（1） 图：放射免疫分析方法原理示意图（2） 技术（操作）要点 抗原抗体反应 标本与试剂混合并温浴 分离技术 分离结合标记物与游离标记物 发射性测量 数据处理 二、抗原-抗体反应 竞争模式 平衡法 非平衡法 温浴条件 温度 酸碱度 基质 图：非平衡法 三、分离技术 非均相免疫分析 结合标记物（Bind，B） 游离标记物（Free，F） 分离方法 聚乙二醇沉淀法 双抗体法 分离技术 图：聚乙二醇-双抗体法( 特异性和低成本） 四、放射性测量和数据处理 抗原-抗体（温浴） 分离结合标记物 放射性测量 数据处理 放射性测量 放射性核素 125I γ射线 测量仪器 采用γ计数器 图：标准曲线 实例： 第二节 免疫放射分析方法 相关知识 免疫放射分析 immunoradiometric assay， IRMA 非竞争性免疫分析 发明人：Miles and Hales 1968 一、分析原理（1） 免疫放射分析 单位点法 适合测定小分子抗原 双位点法 适合测定