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☆ 选修3 现代生物科技专题 ☆
最新考纲
高频考点
1.基因工程的诞生Ⅰ
2.基因工程的原理及技术Ⅱ
3.基因工程的应用Ⅱ
4.蛋白质工程Ⅰ
5.转基因生物的安全性Ⅰ
6.生物技术中的伦理问题Ⅰ
7.生物武器对人类的威胁Ⅰ
1.基因工程中基本工具的作用及特点
2.基因工程原理及基本操作程序
3.基因工程育种过程设计
4.基因工程成果典型实例分析及应用
5.蛋白质工程及其与基因工程的区别和联系
6.生物技术引起的安全性问题与伦理问题
7.生物武器的种类、特点及对人类的危害
一、基因工程的工具及其操作程序
1.基因工程的基本工具
限制酶
DNA连接酶
载体
作用
切割目的基因和载体
连接DNA片段,形成重组DNA
携带目的基因进入受体细胞
作用
部位
两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键
限制酶
DNA连接酶
载体
作用
特点
(条件)
(1)识别特定的核苷酸序列
(2)在特定位点上切割
(1)E·coli DNA连接酶只连接黏性末端
(2)T4DNA连接酶连接黏性末端和平末端
(1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制
(2)有多个限制酶切割位点
(3)具有特殊的标记基因
常用
类型
EcoRⅠ限制酶
SmaⅠ限制酶
E·coli DNA连接酶
T4DNA连接酶
质粒、噬菌体、动植物病毒
2.基因工程的基本操作程序
(1)目的基因的获取
①从基因文库中获取目的基因
优点:有了基因文库,就可以随时从中提取所需要的目的基因,引入受体细胞使之表达。
②人工合成目的基因
③利用PCR技术扩增目的基因
a.PCR:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。PCR扩增是获取目的基因的一种非常有用的方法,也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。
b.目的:通过指数式扩增获取大量的目的基因。
(2)基因表达载体的构建
①目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并可以遗传给下一代,并使目的基因能够表达和发挥作用。
②基因表达载体的构建方法
(3)将目的基因导入受体细胞
①目的:目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
②受体细胞种类不同,导入方法不同。
受体细胞种类
方法
植物细胞
①农杆菌转化法:目的基因插入Ti质粒的T-DNA→转入农杆菌→导入植物细胞→稳定维持和表达
②基因枪法
③花粉管通道法
受体细胞种类
方法
动物细胞
显微注射法:目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→新性状动物
微生物
细胞
Ca2+处理受体细胞→感受态细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子
③受体生物不同,所用的受体细胞种类也不相同。
a.植物:可以是卵细胞(受精卵)、体细胞(可经组织培养成为完整植株)。
b.动物:受精卵(因为体细胞的全能性受到严格限制)。
④转化实质:目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。
(4)目的基因的检测与鉴定
类型
步骤
检测内容
方法
结果显示
分
子
检
测
导入
检测
目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上
DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间)
是否成功显示出杂交带
表达
检测
目的基因是否转录出mRNA
核酸分子杂交技术( DNA和mRNA之间)
同上
目的基因是否翻译出蛋白质
蛋白质分子杂交(抗原和抗体之间)
同上
个体生物学水平的鉴定
①确定是否具有抗性及抗性程度
②基因工程产品与天然产品的活性是否相同
①抗虫或抗病的接种实验
②基因工程产品与天然产品活性的比较
是否赋予了预期抗性或蛋白质活性
(1)一般来说,天然载体往往不能满足人类的所有要求,因此人们根据不同的目的和需要,需要对某些天然的载体进行人工改造。
(2)插入的目的基因的表达需要调控序列,因而用作载体的质粒的插入部位之前需有启动子,之后需有终止子。
1.(2009年潍坊模拟)质粒作为“分子运输车”的条件是 ( )
①能够自我复制 ②双链环状DNA分子 ③有多个限制酶切点 ④有标记基因 ⑤真核细胞中没有
A.①②③④⑤ B.①②③④
C.①③④ D.②③⑤
【解析】 运载体具备的条件是:能自我复制;有标记基因;最好有多个限制酶切点;能在宿主细胞内稳定存在。
【答案】 C
2.(2009年南通调研)下列关于基因表达载体构建的相关叙述,不正确的是 ( )
A.需要限制酶和DNA连接酶
B.必须在细胞内进行
C.抗生素抗性基因可作为标记基因
D.启动子位于目的基因的首端
【解析】 基因表达载体是目的基因与载体的结合,在此过程中需用同一种限制酶切割目的基因与载体,用DNA连接酶将相同的末端连接起来;基因表达载体的构建是在细胞外进行的;基因表达载体包括启动子(位于基因首端使转录开始)、终止子、目的基因和标记基因。
【答案】 B
二、基因工程的应用成果及蛋白质工
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