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PCR技术的原理及操作 什么是PCR PCR: Polymerase chain reaction，即聚合酶链反应 PCR的基本工作原理： 以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的原则沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成。 PCR技术的原理 PCR反应包括7种基本成分：模板DNA、特异性引物、热稳定DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸（dNTP）、二价阳离子、缓冲液及一价阳离子 基本反应步骤 ：变性--退火--延伸 最后通过染料染色DNA后显色检出 PCR技术的原理 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~35轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 RT-PCR的原理 相对于PCR，在开始阶段增加步骤：RNA ? cDNA合成，是单链到双链的过程。 RT-PCR的基本步骤 实时荧光定量PCR的原理 实时荧光定量PCR技术 (Real-Time Quantitative PCR) 是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 常