养血生乳口服液对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫调节作用.docVIP

养血生乳口服液对环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫调节作用 　　[摘要] 目的 探讨养血生乳口服液对环磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影响。 方法 采用环磷酰胺制造小鼠免疫抑制模型，以参坤养血口服液作为对照，用养血生乳口服液进行治疗后，观察各组小鼠外周血白细胞数目、脾脏T细胞数、腹腔巨噬细胞吞噬功能和血清溶菌酶含量及其对二硝基氟苯诱导迟发型超敏反应的影响。 结果 养血生乳口服液能显著增加免疫功能低下小鼠的外周血白细胞数目、脾脏T细胞数和血清溶菌酶含量，提高免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬功能和二硝基氟苯诱导的迟发型超敏反应。 结论 养血生乳口服液能显著增强环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫功能。 　　[关键词] 养血生乳口服液；环磷酰胺；免疫功能；小鼠 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）06（a）-0022-03 　　妇女产后不同程度地存在亡血失津和多虚多瘀的状态，易继发产后感染和延缓产褥复旧进程。养血生乳口服液根据中医学乳血同源理论，采用黑芝麻、当归、党参、大枣等12味中药研制而成，具有改善产后乳汁分泌、补血等药理作用，临床用于防治产后缺乳和促进产褥复旧等有较好疗效[1-2]。本文进一步观察了养血生乳口服液对环磷酰胺致免疫低下小鼠免疫功能的影响，现报道如下： 　　1 材料与仪器 　　1.1 动物 　　ICR小鼠，雌雄兼用，体质量（20±2）g。昆明种小鼠，♀，体质量（20±2）g。均由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（鄂）2010-0007。 　　1.2 试药 　　养血生乳口服液，处方由黒芝麻、当归、党参、黄芪、桑寄生、益母草、大枣等中药组成。每1 mL相当于原生药1.8 g，临用时用蒸馏水配制成10%和20%浓度的溶液。参坤养血口服液（三九黄石制药厂，每1 mL相当于原生药1.35 g，批号091206），临用时用蒸馏水配制成20%浓度的溶液；注射用环磷酰胺（上海华联制药有限公司生产，批号：090719），临用时用注射用水配制成5 g/L浓度的溶液；抗小鼠Thy1.2单克隆抗体（北京医科大学免疫学教研室提供）；鸡红细胞悬液，取新鲜鸡血5 mL，离心去上清液，以生理盐水洗涤离心2次，取1 mL用生理盐水配制成5%鸡红细胞悬液；2，4-二硝基氟苯，郑州化学试剂三厂生产，批号：091123，临用时以丙酮麻油（1∶1）配制成1%溶液。 　　1.3 仪器 　　680型酶标仪（美国BIO-RAD公司生产）；XDS-1B多功能显微镜（重庆光电仪器总公司生产）。 　　2 方法 　　2.1 动物分组及模型制作 　　取健康小鼠50只，随机分为5组，每组10只，即正常对照组、模型对照组、参坤养血口服液组和养血生乳口服液低、高剂量组。除正常对照组外，其余各组均腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg，连续5 d，制造免疫抑制模型[3]。各组小鼠同时按0.2 mL/10 g体质量剂量灌胃，每天1次，连续14 d。其中正常对照组和模型对照组灌服生理盐水，其余3组分别灌服20%参坤养血口服液、10%和20%养血生乳口服液。 　　2.2 对外周血白细胞数的影响 　　末次给药后24 h，眼眶静脉丛取血，血液稀释20倍，用血球计数板镜下计白细胞数（WBC）。 　　2.3 对脾脏T细胞数的影响 　　于末次给药后24 h处死动物，无菌条件下剖取脾脏，钢网研磨法制备脾细胞悬液。在40孔塑料培养板中，加入2×106个/mL的脾细胞悬液50 μL，抗小鼠Thy1.2单克隆抗体20 μL，37℃孵育30 min，再加入1∶5豚鼠血清补体20 μL，继续孵育1 h后用1%伊红Y染色，观察200个淋巴细胞，计算其百分率。 　　2.4 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 　　各组小鼠于末次给药后24 h腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.6 mL/只。6 h后颈椎脱臼处死动物，剪开腹腔皮肤，腹腔注射无菌生理盐水2 mL。轻揉腹部，吸取腹腔洗液1 mL，滴于载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盘内，在37℃恒温水浴中保温30 min。用生理盐水漂洗以除去未贴片细胞，晾干。Giensa-wrighf染色，油镜观察，计数100个巨噬细胞，以吞噬百分率作为吞噬功能指标[4]。 　　2.5 对血清溶菌酶含量的影响[5] 　　末次给药后24 h，眼球摘除取血，离心分离血清。将微量溶球菌接种于琼脂培养基中培养24 h，加少许生理盐水，用刮板将菌苔轻轻刮下，洗涤后配成3个麦氏比浊单位。置70℃水浴中1 h，每1 mL中加0.5%台盼兰10 μL，混匀后置室温中5 min。用生理盐水反复洗涤并离心至上清液呈无色，恢复原体积备用。取洁净V形孔板，加待测血清15 μL，每个样品为复孔，用生理盐水作阴