第四章植物细胞工程的基本原理和技术基础讲述.pptVIP

根据培养物的培养过程，培养基分为初代培养基和继代培养基。初代培养基是指用来第一次接种外植体的培养基。继代培养基是指用来接种继初代培养物的培养基。 根据其作用不同，培养基分为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基。 根据其营养水平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、 N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、 Miller等。完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如生长调节物质和其他复杂有机物质等。 培养基的筛选：1.无机营养成分：一般在现有培养基配方中选择。可以参考前人的经验，例如：MS是广谱性培养基，N6用于单子叶植物的培养。豆科多用B5培养基。2、植物生长调节剂：必须进行筛选试验。总体原则-当诱导愈伤组织形成时，细胞分裂素和生长素相对平衡；诱导芽分化时，细胞分裂素水平应高于生长素，诱导根则要低。3、有机成分要根据培养类型考虑，如进行器官和组织培养，一般不加复杂有机成分，而进行细胞和原生质体培养则要加。 （2）培养基的配制 配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类和激素类分别配制成比培养基浓度大若干倍的母液。当配制培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液稀释即可。 母液应保存在冰箱中备用，保存时间不可过长，当母液出现沉淀或霉菌团时，则不能使用。 贮备液（母液）的配制：  a、方便  b、准确（有些成分量太小） 培养基的配制步骤： 1、计量  根据配制培养基的量和母液的浓度计算需要吸取母液的量，计算公式：吸取量 ml=培养基中物质的含量（mg/L）×1000ml/母液浓度（mg/L）。2、移液 取医用瓷缸一只，加入少量的蒸馏水，按照计算吸取母液的量依次吸取各母液置于医用瓷量杯中备用。 注意 （1）用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次。（2）量取母液时，不要漏掉或多加。（3）移液管不能混用。 3、称取琼脂蔗糖备用4、融化 用搪瓷量杯量取600～700ml的蒸馏水放在电炉上，加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状将其取下，加入蔗糖。 大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。 5、混合 将融化的琼脂和母液充分混合，用蒸馏水定容到1000ml，来回混合几次。6、调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH或HCl溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.4～7.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH达到要求为止(在调制时要比目标pH值偏高0.2～0.5个单位，因为培养基在灭菌过程中由于糖等物质的降解，pH值会下降0.2～0.5个单位左右)。 7、分装 溶化的培养基应该趁热分装。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5～1/4。每1L培养基，可分装20～30瓶。8、包扎 用封口膜封口，外边可加一层牛皮纸，扎好绳子，用铅笔或碳素墨水笔在牛皮纸上写上培养基的代号。9、培养基的灭菌 4.2.2 影响植物组织培养的环境条件? 培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、pH值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组织。 4.2.2.1 温度 培养都是在23～27℃之间进行，一般采用25±2℃。 喜温性植物：茄科、禾本科、兰科等。培养温度一般控制在26-28℃。 冷凉性植物：百合科、十字花科、菊科等。通常培养温度控制在18-22℃ 或25℃。 4.2.2.2 光照的影响 培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光周期等方面： 光周期：黑暗与光照交替的时间 光 量：光照强度 光 质：光的波长 1、光周期对植物细胞脱分化和再分化的效应例1：黑暗中培养的烟草花药，其胚状体的分化与幼植物的生长，同经光照培养一样的多。例2：短日照敏感的葡萄品种，它的茎切段，仅在短日照条件下才能分化成根。例3：对日照不敏感的葡萄品种，可在任何光周期下分化成根。结论：光周期的需要与否，应根据植物种类、培养的目的来决定。 离体培养中光周期的调节 最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。 愈伤组织诱导阶段，一般采用三种做法：全暗、周期性光照、散射性光照。依据植物种类不同做法不同，多数植物适合全暗或周期性光照。 器官发生阶段：一般给予周期性光照比较好。 2、光量的影响 光照强度对培养细胞的增殖和器