异甜菊醇在大鼠离体肝灌流中的药代动力学研究.docVIP

异甜菊醇在大鼠离体肝灌流中的药代动力学研究 　　[摘要] 目的 研究异甜菊醇在大鼠肝脏内的代谢情况。 方法 给予SD大鼠离体肝灌流（ILP）行异甜菊醇的初步药动学研究（体外试验）。分离5只大鼠肝脏然后用含有异甜菊醇的介质进行循环灌流，在时间为0、1、3、5、10、15、20、25、30、40、50、60 min时收集灌流液样品，每间隔10 min收集胆汁样品，样品用HPLC-UV分析。尿液（前面实验收集）、灌流液和胆汁样品用β-葡萄糖醛酸酶（1.3 U/μL）培养再进行HPLC-UV分析。 结果 40～50 min后的灌流液中，HPLC法检测不到异甜菊醇，而胆汁中完全没有检测到。灌流液和胆汁分别经过β-葡萄糖醛酸酶/硫酸根培养后，色谱方法与灌流液的一样保持不变，胆汁样品中得到了明显的异甜菊醇峰。60 min中的药动学参数T1/2、AUClast、Vz（obs）、CLH、EH（肝脏提取率）和回收率（R0～60：代谢率）分别为：（17.82±2.5）min、（258.18±33.2）min·μg/mL、（425.35±32.1）mL、（17.7±2.2）mL/min、（0.59±0.07）和（18.08±2.5）。 结论 经过40～50 min灌流后异甜菊醇主要在肝脏中积累，以葡萄苷酸化形式从胆汁排泄，很可能大部分经过胆汁排泄慢慢的消除到粪便中。 　　[关键词] 异甜菊醇；离体肝灌流；结合物 　　[中图分类号] R972 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）10（c）-0144-04 　　异甜菊醇是蛇菊苷的一个衍生物，是一个从植物甜菊提取的不含卡路里的增甜剂。异甜菊醇在高血压、炎性疾病、糖尿病和癌症的治疗中具有潜在疗效而被作为一个候选药物。最近研究显示异甜菊醇能降低Zucker糖尿病大鼠的血糖浓度[1]，并减少SD大鼠由局部缺血-在灌注引起的心脏损伤[2]，它还抑制肿瘤启动剂在拉吉细胞中的激活[3]。关于异甜菊醇微生物转化的文献显示异甜菊醇由游动放线菌属和毛霉菌属代谢[4]。和甜菊糖醇一样，异甜菊醇同样也是蛇菊苷的一个代谢组分[5]，研究显示甜菊糖醇在大鼠肝脏中的积累在注射10 min后是最高的。通过前期研究推断甜菊糖醇代谢产物在胆汁中可能发生共轭作用。近来更多的研究显示蛇菊苷和甜叶菊甙A在大鼠中代谢为甜菊糖醇[6]。然而，异甜菊醇在组织和器官中的药动学至今还未研究过，而药物大多数在肝脏中代谢，因此，在本次实验中异甜菊醇初步药动学研究在SD大鼠离体肝灌流（ILP）中进行。弄清甜菊糖醇在大鼠离体肝中的代谢研究对将其开发为新药具有非常重要的意义。 　　1 动物与试药 　　1.1 动物 　　雄性SD大鼠（250～380 g）从医学和兽医科学中心获得（IMVS，Adelaide，SA，澳大利亚），在代谢笼内单独饲养，实行12 h/12 h白天/黑夜循环，自由进食标准饮食和水，室温为20～23℃。本次实验获得了动物伦理委员会的批准。 　　1.2 试药 　　2 方法与结果 　　2.1 ILP实验 　　灌流之前每只大鼠腹腔注射戊巴比妥钠60 mg/kg麻醉，然后按照文献[7]所述方法进行ILP实验，整个循环灌流过程保持37℃。灌流液为不含红细胞-/白蛋白的Kreb′s-Henseleit碳酸氢盐缓冲液，葡萄糖为16.5 mmol/L，牛磺胆酸钠为8.33 μmol/L，pH为7.4～7.5；灌流过程中，灌流液的pH值通过5%CO2和95%O2保持，肝脏灌流速度为30 mL/min。用不含药物的空白灌流液平衡20 min后，用250 mL含有20 μg/mL的异甜菊醇灌流液对肝脏进行循环灌流60 min。在时间为0、1、3、5、10、15、20、25、30、40、50、60 min时收集灌流液样品，每间隔10 min收集胆汁样品，样品用HPLC-UV检测。 　　2.2 样品分析 　　用HPLC-UV检测灌流液和胆汁中异甜菊醇的浓度[8]。流动相为磷酸二氢钠和乙腈（45∶55，用0.1 mol/L的磷酸调节pH为4.15），色谱柱为EPS C18（5 μm，250 mm×4.6 mm），预柱为C18（Alltech Associates，Deerfield，IL，美国），流速为1.0 mL/min；紫外检测波长为210 nm。在此色谱条件下，异甜菊醇的保留时间约为11 min[9-10]。标准校准样品用空白灌流液稀释浓度为100 μg/mL异甜菊醇储备液到1.5～25 μg/mL。质控样品用150 μg/mL异甜菊醇储备液稀释。收集到的灌流液和胆汁样品离心（3000×g，10 min）后取100 μL上清液进HPLC分析。 　　2.3 β-葡糖醛酸糖苷酶培养 　　在体内实验中收集的尿