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无菌药品包装密封完整性验证研究 　　【摘要】密封的包装是保证药品无菌的重要手段之一，本文针对无菌原料药企业常用的包装——10Kg装铝瓶进行论证，并设计了完整的验证步骤，对药用铝瓶的包装密封完整性进行针对性验证。 　　【关键词】无菌原料药；药品包装；完整性；验证 　　1、目的 　　用微生物挑战试验——液体浸没法，检测瓶装无菌产品密封系统的完整性。 　　2、适用范围 　　本验证适用于检测10Kg装铝瓶装无菌产品密封系统的完整性。 　　3、铝瓶生产厂家及批号（略） 　　每个厂家的铝瓶都应取至少3个批次进行试验，以充分证明该厂家生产铝瓶的密封性。 　　4、概述 　　4.1试验原理 　　向无菌产品铝瓶中灌装无菌培养基并在正常生产线上加塞和压盖，将铝瓶封口端浸在含有高浓度的细菌悬液中，培养这些铝瓶并检查是否有挑战微生物侵入。 　　4.2试验中的关键控制点 　　a）挑战用培养基的配方； 　　b）挑战用微生物细胞的大小； 　　c）挑战用菌悬液的浓度要足够高（不得低于105CFU/ml）； 　　d）样品浸入菌悬液的时间； 　　e）无菌培养基对挑战微生物的灵敏度。 　　5、内容 　　5.1仪器用具 　　5.2培养基 　　5.3挑战菌：粘质沙雷氏菌【CMCC（B）41 002】 　　注：粘质沙雷氏菌为短杆菌，约0.5×（0.5～1.0）um，周身鞭毛，能运动，无荚膜，无芽胞，常用于0.45um滤膜的过滤除菌验证。 　　5.4实验前准备 　　5.4.1无菌培养基的灌装 　　将制备好的培养基经湿热灭菌，待培养基冷却至室温后，在A级层流的保护下，通过无菌操作将培养基灌装至灭菌的10Kg装铝瓶中，在正常生产线上加塞、压盖。 　　5.4.2无菌检查 　　随机抽取已灌装培养基的铝瓶7瓶，在30-35℃培养14天，每隔两天随机抽取一个铝瓶进行无菌检查。 　　所有铝瓶均应无微生物生长。 　　对于铝瓶，因培养期内无法观察是否有微生物生长，检查时，将铝瓶内培养基倒出，转移至一无菌玻璃容器内，观察是否有微生物生长，如发现任何瓶内培养基有微生物生长，丢弃所有的铝瓶，重新开始试验。 　　5.4.3对试验用铝瓶进行培养基灵敏度检查（略） 　　5.4.4挑战用菌悬液的制备 　　取2-3支粘质沙雷氏菌的斜面培养物，用10ml 0.9%无菌氯化钠溶液洗脱菌苔，将洗脱后的菌苔接入含200L培养基的容器内，于30-35℃培养18-24小时。培养结束后，能明显见容器内培养基浑浊。此菌液用于铝瓶的液体浸没试验。显微镜下观察菌液，细胞应处于生长态，并且运动活跃，活动性细胞应占90%以上。通过无菌操作取无菌0.9%氯化钠溶液进行1ml→9ml的10倍系列稀释，选择适当的稀释级，用营养琼脂培养基倾倒法计数，置30-35℃培养48小时。菌液浓度应大于106，计数结果应予以记录。 　　5.5微生物挑战——液体浸没试验 　　5.5.1将上述挑战用菌悬液倒入一敞口不锈钢容器，长×宽×高为1.5m×1.5m×0.2m。 　　5.5.2分别随机抽取10个铝瓶，将铝瓶倒立于挑战菌液中，铝瓶用试管架或其他适当的方式固定，使其倒置于菌液中，瓶内的无菌培养基应充分浸没封口内表面，封口的的外表面和瓶颈应完全浸没在菌悬液中。如下图所示： 　　5.5.3在常温常压下将铝瓶倒置在菌悬液中持续不少于4小时。试验结束后，取敞口容器中的菌悬液，按5.4.4进行菌液浓度以及细菌细胞的活动状态的测定。 　　5.5.4从菌悬液中取出铝瓶，擦净瓶外的残留菌液，然后用无菌注射用水将铝瓶外表面冲洗干净。 　　5.5.5将冲洗干净的铝瓶放在塑料袋中，置30-35℃培养14天，按5.4.1的方法检查瓶内是否有微生物生长，有生长记作“+”，无生长记作“-”，未进行观察则记作“N/A”，记录检查结果。 　　5.5.6如果所有铝瓶都无菌生长，则取2瓶浸过菌悬液的铝瓶，进行培养基的灵敏度检查。 　　5.5.7所有接触过挑战微生物的物品均必须经灭菌后丢弃。 　　5.6结果判断标准 　　5.6.1只有5.4.3、5.5.6中的培养基灵敏度检查结果均符合规定，挑战试验才有效。 　　5.6.2在整个挑战过程中，挑战用菌悬液的菌液浓度不得低于1.0×106CFU/ml。 　　5.6.3记录挑战试验中有微生物生长的铝瓶数，如果有微生物生长，必须进行以下调查： 　　a）检查是否由于铝瓶封口有缺损造成微生物的侵入，如有，应描述并记录观察到的所有铝瓶封口的缺损（如拍照等）。b）进行菌种鉴别确认瓶内微生物是否为粘质沙雷氏菌。 　　5.6.4如果任何有挑战微生物生长的铝瓶，不是由于明显的铝瓶密封件的物理性缺损造成微生物的侵入和生长，判该试验结果不合格。如果所有经挑战的铝瓶均无