ABCG2在乳腺癌及癌旁组织中的表达及临床相关性研究.docVIP

ABCG2在乳腺癌及癌旁组织中的表达及临床相关性研究 　　[摘要] 目的 研究ATP结合盒转运体基因2（ABCG2）在乳腺癌及癌旁组织中的表达并探讨其与临床病理特征的相关性。 方法 收集经手术治疗并有明确病理诊断的初治乳腺浸润性导管癌患者的石蜡标本共112例， 进行免疫组织化学检测ABCG2的表达情况，分析其与临床病理特征的相关性。 结果 ABCG2在乳腺癌组织的表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P0.05）。 结论 ABCG2在乳腺癌组织的表达高于癌旁组织，ABCG2+与乳腺癌细胞的生长、转移有关。 　　[关键词] 乳腺癌；干细胞；ATP结合盒转运体基因2 　　[中图分类号] R36 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）07（c）-0104-03 　　乳腺癌术后的复发及转移是影响患者生存期的重要因素，近年来提出的乳腺癌干细胞（breast cancer stem cell，BCSC）定向分化理论能够在一定程度上解释抗肿瘤治疗的耐药发生及影响肿瘤的远隔转移等问题。ATP结合盒转运体基因2（ATP binding cassette trans porter gene 2，ABCG2）为ABC转运蛋白超家族的一员，能够保护干细胞避免被细胞毒性药物杀伤[1]，它在CD44+/CD24-原代乳腺癌细胞中表达水平较CD44-/CD24+细胞明显升高，且化疗后乳腺癌干细胞比例增加[2]。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　收集辽宁省人民医院2010年6月～2011年6月经手术治疗并有明确病理诊断的初治乳腺浸润性导管癌患者的手术切除石蜡标本共112例，中位年龄46.5岁，其中，绝经前患者55例；临床分期：Ⅰ期26例，Ⅱ期42例，Ⅲ期44例。取乳腺癌组织为实验组，癌旁组织为对照组，癌旁组织距肿瘤5 cm；标本经4%甲醛固定并用石蜡包埋，连续制成3 μm厚切片若干张，进行染色。 　　1.2 试剂 　　兔抗人 BCRP/ABCG2单克隆抗体（BXP-21）为北京博奥森公司产品；PV2 9000二步法试剂盒及DAB试剂盒为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。用10%正常动物血清代替一抗作阴性对照。 　　1.3 实验方法 　　免疫组织化学检测ABCG2的表达（二步法）：石蜡切片常规脱蜡至水。蒸馏水冲洗，PBS溶液浸泡5 min。加3%H2O2室温孵育10 min。加第一抗体，ABCG2单抗工作浓度为1∶200，4℃冰箱过夜，滴加试剂1，37℃水浴箱孵育20 min，滴加试剂2，37℃水浴箱孵育20 min，水化后各步骤之间均用PBS冲洗3次，每次2 min，加DAB溶液显色，自来水充分冲洗，苏木精复染、脱水透明、封片，镜下观察。 　　1.4 ABCG2染色阳性判断标准 　　ABCG2主要在细胞膜和细胞质中表达，棕黄色颗粒状，弥散分布；少数间质染色，但较癌组织染色浅，且分布范围小而不均。根据肿瘤细胞染色程度以及阳性细胞所占百分比进行评分。阴性（-）：阳性细胞占25%以下，染色极浅；弱阳性（±）：阳性细胞占25%～50%，染色呈浅棕色；阳性（+）：阳性细胞占51%～75%，染色为棕色；强阳性（++）：阳性细胞占75%以上，染色为深棕色。（-）和（±）为低表达组，（+）和（++）为高表达组。 　　1.5 统计学方法 　　采用SPSS 16.0统计学软件对所有数据进行分析，ABCG2在癌与癌旁组织表达的比较采用配对χ2检验，单因素分析采用χ2检验，以Logistic回归进行多因素分析，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 ABCG2在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达 　　112例乳腺浸润性导管癌标本中，高表达者58例（占51.8%），低表达者54例（占48.2%）；同样例数的癌旁组织中，高表达者11例（占9.8%），低表达者101例（占90.2%）。58例高表达癌标本中，癌旁组织高表达者9例，低表达者49例；54例低表达癌标本中，癌旁组织高表达者2例，低表达者52例（图1、2）。对于ABCG2的表达，乳腺癌组织和癌旁组织两组之间差异有统计学意义（P0.05）。 　　图1 ABCG2在乳腺癌组织中的阳性表达（×100） 　　图2 ABCG2在乳腺癌组织中的阳性表达（×200） 　　2.2 患者的临床及病理特点与ABCG2表达的关系 　　单因素分析提示，ABCG2在肿瘤组织的表达情况与腋淋巴结转移、临床分期有关（P0.05）；多因素分析提示，腋淋巴结转移为独立危险因素（P0.05）（表1）。 　　表1 患者的临床及病理特点与 ABCG2表达的关系 　　3 讨论 　　乳腺癌的治疗可以部分缓解甚至完全缓解临床症状，但并未改善总生存状况，其原因可能是肿瘤