小剂量地塞米松对脓毒症大鼠金属基质蛋白酶9等炎症因子的影响.docVIP

小剂量地塞米松对脓毒症大鼠金属基质蛋白酶9等炎症因子的影响 　　[摘要] 目的 探讨建立大鼠盲肠结扎穿刺（CLP）模型，研究地塞米松对炎症因子金属基质蛋白酶9（MMP-9）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平变化以及大鼠生存率影响。 方法 78只SD大鼠完全随机分为CLP手术组、地塞米松（DEX）0.1 mg/mL治疗组（DEX），并建立假手术组（Sham）。DEX治疗组在手术完成后立即给予对应剂量的地塞米松。动物成模在各对应时间点取材，检测各组生存率、肺干湿重系数（W/D），MMP-9及TNF-α、IL-6、IL-8血清水平。 结果 在使用DEX干预后大鼠生存率有所改善，尚无统计学意义（P 0.05）。各组炎症介质均出现下降，24 h组IL-6差异有统计学意义 （P 0.05），48 h组IL-6、MMP-9及IL-8差异有统计学结果（P 0.01）。12 h组DEX干预后W/D差异有统计学意义（P 0.05）。DEX干预组W/D 24 h组和48 h均高于CLP组。 结论 脓毒症早期小剂量使用地塞米松可以有效的改善脓毒症的预后。地塞米松通过抑制炎症因子改善脓毒症预后，地塞米松对于脓毒症晚期炎症因子水平MMP-9及IL-8的调控作用可能较TNF-α等早期炎症因子更为重要。 　　[关键词] 脓毒症；地塞米松；金属基质蛋白酶-9 　　[中图分类号] R722.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（b）-0106-04 　　虽然目前对于皮质类固醇激素的临床使用尚有争议，2008拯救败血症患者运动（SSC）指南仍建议脓毒症休克持续低血压的情况下，若使用液体复苏以及升压药物无效时使用皮质类固醇激素[1]。地塞米松（Dexamethasone，DEX）作为临床上常用的皮质酮激素（glucocorticoid，GC），在临床上已进行广泛的应用。并有大量的文献表明小剂量的使用激素可以对脓毒症预后有一定改善[2-3]。本研究拟通过盲肠结扎穿刺（CLP）手术建立脓毒症大鼠模型后进行地塞米松干预，来研究、观察地塞米松对金属基质蛋白酶-9（MMP-9）和肿瘤环死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的影响及对生存率的作用。 　　1 资料与方法 　　1.1 实验动物 　　SD大鼠78只，体重235～260 g，SPF级大鼠，实验大鼠均购自第二军学动物实验中心。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 分组及常规处理 　　78只SD大鼠完全随机分为CLP手术组、地塞米松治疗组（DEX），每组各36只，组内分12 h组（共6只）、24 h组（共10只）、48 h组（共10只）、96 h组（共10只）。各组分别在预定时间点处死存活的大鼠。DEX治疗组在手术完成后6 h皮下注射0.1 mg/mL的DEX。假手术组（sham）共6只，打开腹腔后仅翻动肠道即关腹，不予手术处理。 　　1.2.2 建立重症脓毒症动物模型 　　1.2.2.1 购入动物后进行适应饲养1周，开始实验前禁食12 h。按照40 mg/kg剂量腹腔注射戊巴比妥。注射麻醉后，将动物置于仰卧位固定于操作板上，腹部手术区去毛后消毒后腹壁作长2 cm切口，切口进腹在分离回盲瓣末端并结扎盲肠，以针头在结扎端处穿刺3次后挤出粪便，最后间断缝合关腹，并在皮下注射生理盐水100 mL/kg抗休克。实验各分组在预定12、24、48 h时间点处死大鼠，处死后实验对象并取标本。假手术组仅开腹翻动肠道后缝合，不予手术处理。术后不予生理盐水补液。假手术组建立10 min后立即予处死。 　　1.2.2.2 DEX治疗组在手术完成后6 h皮下注射0.1 mg/mL的DEX。CLP组不进行任何干预治疗。 　　1.3 评价指标测定 　　1.3.1 生存率 　　记录各实验时间点大鼠的生存数目。 　　1.3.2 采集标本 　　1.3.2.1 采集血清标本：处死大鼠并取血置于离心管中，使用低温离心机离心30 min（2000 r/min），离心半径13.5 cm，取血清后立即冻存于-80℃冰箱中，待测定。 　　1.3.2.2 肺组织取材：处死实验动物后开胸取肺，吸水纸吸取左肺表面液体，电子天平称重后立即置于恒定90℃烤箱中烘干72 h后称取干重，计算肺组织干/湿重比（W/D）。 　　1.3.3 血清炎症因子的测定 　　采取双抗体夹心ELISA法检测血清炎症因子MMP-9及TNF-α、IL-6、白介素-8（IL-8）测定，试剂盒均购自上海西塘公司。严格按照试剂盒说明操作。 　　1.4 统计学方法 　　采用统计软件SPSS 17.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±