异基因脐血干细胞穴位移植对类风湿关节炎大鼠细胞因子白介素—1β、肿瘤坏死因子—α、白介素—4、白介素—.docVIP

异基因脐血干细胞穴位移植对类风湿关节炎大鼠细胞因子白介素—1β、肿瘤坏死因子—α、白介素—4、白介素— 　　[摘要] 目的 观察异基因脐血干细胞（hUCBSCs）穴位移植对类风湿关节炎大鼠模型（CIA）细胞因子白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）的影响，探讨hUCBSCs穴位移植治疗类风湿关节炎的作用机制。 方法 先进行脐血CD34+细胞分选，将120只大鼠随机分为正常对照组、模型组、hUCBSCs腕关节腔注射治疗组、hUCBSC尾静脉注射治疗组、hUCBSCs外关穴注射治疗组、甲氨喋呤（MTX）灌胃治疗组，每组20只。采用邓安梅法建立类风湿关节炎大鼠模型。于大鼠免疫接种后第31天（除正常对照组及模型组用等体积蒸馏水）向外关穴、腕关节腔、尾静脉注射0.5 mL的0.9%氯化钠注射液和0.5 mL hUCBSCs悬液（含干细胞2×107/mL），经过4周后，取血，ELISA法检测上清液中细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的含量。 结果 hUCBSCs外关穴注射治疗组IL-1β[（0.404±0.016）μg/L]、TNF-α[（1.987±0.113）μg/L]较甲氨蝶呤组IL-1β[（0.513±0.035）μg/L]、TNF-α[（2.704±0.149）μg/L]明显降低；外关穴注射治疗组IL-4[（7.584±0.548）μg/L]、IL-10[（49.973±4.017）μg/L]较MTX灌胃治疗组IL-4[（6.803±0.513）μg/L]、IL-10[（46.143±3.478）μg/L]明显升高，差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 hUCBSCs外关穴穴位注射治疗能够显著抑制IL-1β、TNF-α表达，上调IL-4、IL-10表达，具有免疫调节作用，有助于类风湿性关节炎的治疗。 　　[关键词] 脐血干细胞；类风湿关节炎；IL-1β；TNF-α；IL-4；IL-10 　　[中图分类号] R684.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）09（b）-0022-03 　　类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节滑膜及周围结缔组织异常增生、关节进行性破坏为特征的慢性自身免疫性疾病[1]。传统的治疗药物，如免疫抑制剂、糖皮质激素、生物制剂等，虽能使部分患者的病情活动得以控制，但长期应用副作用较大[2]。间充质干细胞因具有免疫调节作用[3]，为RA治疗带来新的希望。本研究尝试采用hUCBSCs穴位移植方法治疗类风湿关节炎大鼠模型（CIA），观察对白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）的影响，探讨hUCBSCs穴位移植治疗RA的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验材料 　　牛Ⅱ型胶原（C7809，5 mg，Sigma公司）；弗氏完全佐剂（098K8729-CAS9007-81-2，10 mL，Sigma公司）；流式细胞仪抗体PE-CD34。甲氨喋呤（MTX），上海医药集团有限公司信通制药厂，产品批号002091。 　　1.1.2 实验动物 　　近交系雌性Wistar大鼠120只，动物年龄45～50 d，体重（180±20）g，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。 　　1.1.3 脐血 　　选择辽宁中医药大学附属医院（以下简称“我院”）妇产科排除了HIV、HBV、HCV、CMV、EBV、梅毒等急、慢性感染，无血液系统疾患及其他系统疾病的非高危妊娠健康足月产妇，新生儿为经阴道顺产且生后皮肤红润，四肢活动良好，无感染征象的脐血。本研究经我院伦理委员会通过，所有产妇及家属知情同意，并签署知情同意书。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 脐血干细胞分离 　　将采集到的新鲜脐血用HES沉淀法分离脐血单个核细胞，制成MNC悬液，用台盼蓝拒染色试验测细胞存活率，若细胞存活率95%，则进行下一步实验。用MiniMACS磁性吸附性分离装置，进行CD34+细胞的分离与纯化，用台盼蓝拒染色试验测细胞存活率，流式细胞仪测定CD34+细胞百分比[4]。将处理完毕的采集物低温冻存以备回输。 　　1.2.2 分组、造模与给药 　　1.2.2.1 实验分组 将近交系Wistar大鼠120只随机分为六组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、hUCBSCs腕关节注射治疗组（C组）、hUCBSCs尾静脉注射治疗组（D组）、hUCBSCs外关穴注射治疗组（E组）、MTX灌胃治疗组（F组），每组20只。 　　1.2.2.2 建立CIA动物模型 实验模型采用邓安梅