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蚕豆根尖微核检测技术 实验目的 1.了解微核检测的原理和毒理遗传学 2.学习蚕豆根尖微核检测技术 实验原理 ?微核（micronucleus，MCN）： 是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构 ?微核率（ MCN ‰）与作用因子的剂量或累积效应呈正相关 ?污染指数 实验材料 实验步骤 1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸泡24h，此间至少换水两次。种子吸胀后，25℃催芽，置于铺有湿润滤纸的培养皿中，经36—48h，大部分初生根长至1—2cm。 2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-5粒初生根生长良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根尖即可。阳性检测因子可采用CrO3、NaN3、重铬酸钾、EDTA为加强阳性效果可适当加大溶度，如1.0—2.5mol/L CrO3和0.5—1.5mol/L NaN3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖12—24h，此时间也可视试验要求和被检液溶度而定。 实验步骤 3、根尖细胞恢复培养：处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次2—3分钟。洗净后再置于铺有湿润滤纸的中，25℃下恢复培养22—24h。 4、根尖细胞固定：将恢复培养后的种子，从根尖顶端切下长1cm左右的幼根，用甲醇-冰醋酸（3：1）固定液固定24h。固定后的根尖如不及时制片，可换入70%酒精中，置4℃冰箱中保存备用。 实验结果 首先在显微镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察。微核大小在主核1/3以下，并与主核分离，着色与主核一致或稍深，呈圆形或椭圆形。每一处理观察3个根尖，每个根尖计数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，计算平均数，即为该处理的MCN ‰ ，即微核千分率，以此可作为一个检测指标。 根据你的实验安排列表填写实验结果。 若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。 污染指数（PI)=样品实测MCN ‰平均值/对照组（标准水）MCN ‰平均值 污染指数在0.50—1.50区间基本没 有污染； 1.51—2.00区间为轻度污染； 2.01—3.50区间为中度污染； 3.51以上为重度污染。 * 蚕豆根尖 5、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏 水，加6mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离10min至根尖软化。 6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1—2min。最后浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下1—2mm长的根尖，滴一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。 7、显微镜观察、微核细胞记数：每一处理观察3个根尖、1000个细胞，统计MCN ‰ ，计算污染指数 实验步骤 实验结果
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