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酶分析法 摘要：蛋白质属性的酶是高效、高度专一的生物催化剂，它和生命活动密切相关。因为酶学在生产实践基础理论研究方面，都起着非常重要的作用。酶分析法则是其中的重要内容，也是目前发展较为迅速的一个领域。酶的选择性及其在低浓度下能催化底物反应的能力，对化学分析有很大的用处。 关键词：特征 意义 方法 应用 引言：酶的催化反应早已用于底物、激活剂、抑制剂以及酶本身的测定。在19世纪中叶已采用酶法来测定糖类。20世纪40年代初，Warburg曾介绍了一项基于使辅酶还原而用光度法来测量NAD和NADP的方法。最新的发展是电化学法与荧光法的应用。所以，酶分析法已成为一项公认的分析技术。酶分析法包括两种类型：一种是以酶作为分析对象，根据需要对样品进行酶含量或活力的测定，通常称为“酶活力测定”。另一种是以酶作为分析试剂，用以测定样品中用一般化学方法难于检测的物质，如酶的底物、抑制剂、活化剂和辅因子等，一般称为“酶法分析”。两者检测的对象虽有所不同，但原理和方法都是以酶能专一而高效地催化化学反应为基础，通过酶反应速度的测定来检测相应物质的含量。此外，为了获得准确可靠的结果，它们都需要选择适宜的反应条件和测定方法。 酶的特征 1．酶分析法具有高度的选择性。原则上讲，一种酶只催化一种反应，或者说只能催化某种特定的化合物或对特定的化学键起作用。这是由酶本身的高度专一性作用的特点所决定的。 2．灵敏度很高。一般可测到0．1／umol·L-1(10-7mol·L-1)。如果与荧光法联用，可高达1nmol·L-1(10-9mol·L-1)左右。 3．作用一般比较迅速。大多数酶促反应在30分钟以内可以完成。反应条件很温和，如在常温、常压和pH近中性的条件下，反应速度很快。 4．酶用量甚微，所以比较经济。 5．精确度一般。这主要取决于微量吸管误差，如1ul以下的量，取样误差较大。 同时也与组合方式有关。 6．适用范围有一定局限性。 只限于酶、底物、辅酶、活化剂或抑制剂的测定。 7．简便程度较差。必须具有酶学知识的操作训练，通常要求尽量减少人为误差，尽可能使所有反应体系条件一致。如加样量、温度、反应时间等都要求比较准确。最适反应条件(如温度、pH等)的确定很重要，一个熟练的酶学工作者，会考虑各种因素，设计的实验比较合理，而且重现性好；未经过专门训练的人，往往容易出错。 酶分析法的意义 酶的应用大致可分为四个方面：(1)用以制造某些产品；(2)用以去除某些物质；(3)用以识别某种化合物；(4)用以测定某种物质。其中(3)和(4)属于酶分析法的范畴。从应用面来看，(1)和(2)最为广泛。例如用酶法生产可的松，用凝乳酶制造乳酪，用果胶酶澄清果汁等。这类事例很多，今后还会日益增加。但另一方面，(3)和(4)的应用也正在迅速扩大.其原因之一是由于酶工业的发展，许多酶能够充分供用。以前酶主要是从动物脏器(如胰脏、心脏、肝脏等)和植物种子中得到。这样，除了原料困难外，同时需要花费大量的劳动力和较长的时间进行分离精制。因而酶的价格十分昂贵，不可能用酶作为分析试剂去测定其它物质，但是随着微生物发酵酶制剂工业的发展，利用各种突变株，已生产出大量的酶。这使得酶的供应从质量和种类上都有了飞跃的发展、酶的价格显善下降。因此，用作分析试剂已成为可能。 酶分析法迅速扩展的第二个原因提由于酶应用形式的发展。由于近十年来酶的圃定化技 术有了很快的发展，使酶的反复使用和连续使用成为可能。固定化酶的品种已有不少，它们一方面和自动化测定技术相结合，促使酶自动化分析法的迅速普及。另一方面也正在进一步简便化，或制成含酶的试纸，或制成酶试剂包出售，一般只需要加一定量的水就可以直接使用。由于上述原因，酶分析法正在临床诊断、食品加工和发酵等方面广泛应用。如用葡萄糖氧化酶(EC．1．1．3．4)测定血液葡萄糖是临床检验中常用的方法，而测定某些酶含量也是临床诊断的重要指标。 酶分析法的分类 应用酶作为分析工具的酶分析法可以对酶的底物、辅酶、活化剂或抑制剂进行定量分析。 常用的方法有动力学分析法、终点测定法和-酶标免疫铡定法。其中终点测定法应用最为普遍。所谓终点测定法是借助某种酶作用，使被测物质定量地进行转变，然后在转化完成后，测定底物、产物或辅酶物质等的变化量。它分为单酶反应定量法和偶联酶反应定量法。 一、终点测定法 ⑴单酶反应定量