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FRET原理及应用纳米材料对于蛋白质再折叠的影响 内容安排 FRET相关基本原理 多色法（Multicolor) sm-FRET研究蛋白质 纳米颗粒对蛋白质折叠的影响 荧光的产生 分子具有不同的能级：分子中的外层电子，一般处于电子的基态 的最低振动能级。 吸收光能以后，它可以被激发到第一电子激发态 的任意振动能级。 被激发的电子，首先释放能量回到 的最低振动能级，然后从 的最低振动能级回到 的各振动能级，并以光子的形式释放能量，即发射荧光。 FRET理论基础 激发能从供能者到受能者的能量的非辐射转移。 两种不同的发荧光分子，一个为D，另一个为A。当D吸收激发光，使D处于状态时 ，这时如果在附近存在A， 的激发能传给附近的A，使A处于激发态 ， 就会发出荧光。 这一现象就称为荧光共振能量转移。 FRET产生的条件 1. D，A都能发荧光。 2. D的发射光谱和A的激发（或吸收）光谱 必须有部分重叠。 3. D，A之间的距离必须小于10nm,一般为 30-70埃之间。 Two color FRET on individual protein 用不同的染料分子对蛋白质进行标定，将FRET标记的样品稀释后置于一个透明的小容器（cuvette)中,置于一个共焦显微镜下，当一个单分子通过经过焦点容器（focal volume)时，供体染料被光照激光激发，它的能量就会转移一部分到受体染料，这时爆发的荧光就会被收集。 Two color FRET on individual protein 依照FRET的效率对蛋白质的不同折叠构象进行识别，对于不同构象的蛋白质分子，它们都有明显的 特征。 Multicolor sm-FRET study of the ROP mutants Dimer ROP Multicolor smFRET study of the ROP mutants Multicolor sm-FRET study of the ROP mutants Multicolor smFRET study of the ROP mutants Multicolor single-molecule FRET and coincidence. 纳米粒子的结构组成 纳米粒子一般都是次微米规模，具有很大的比表面积，因此，吸附能力很强。主要由两部分组成： 1.型芯材料（core material) 一般组成材料，例如多肽类，磷脂类，乳酸等等。 2.表面改性剂(surface modifier) Conformational changes occur when protein adsorb onto nanoparticles 牛血清白蛋白（BSA），当它附着于金纳米晶体表面时，BSA的a-螺旋线结构就会就会减少，蛋白质的转变结构（turn structures)就会增加；而且热稳定性下降，对一些化学变性试剂变的很敏感。 纳米粒子体积的影响 例如，当RNase A吸附在 纳米粒子的表面时，其热力学稳定性发生了变化。 凝胶纳米粒子的分子伴侣作用 1.CHP--CAB 2.AuDA Three positively charged proteins used in the refolding study Thermal denaturation followed by nanoparticle mediated refolding of proteins 谢谢大家 * * Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. C