SNP分型技术简介3(高遄)课件.pptVIP

5.3.1TaqMan 技术 特点： 优点：不需要分离或洗脱过程，提高了实验速度，同时减少了PCR 污染的可能性；操作简单快速，特别适合少量位点大量样本（几千个）的分型项目。 缺点：不适合多位点少量样本（几十个）分型, 特别是频率偏低的位点；不能同时采用两个及两个以上的探针同时进；探针成本较高，实验花费大 5.3.2连接酶检测（LDR） 原理： 基于耐高温连接酶的SNP快速检测技术。 当探针与目的DNA互补配对后，连接酶能通过催 化磷酸二酯键将相邻的两根探针连接；当探针DNA 的接头处存在碱基错配，连接反应便不能进行。 5.3.2连接酶检测（LDR） (1)多重PCR (Multiplex PCR)获得含有待检测突变位点的基因片断 (2)多重LDR (Multiplex LDR) (3)通过测序仪电泳读取检测结果 5.3.2连接酶检测（LDR） 优化后的LDR技术---新型通用探针LDR分型技术 P1×2：两组检测探针(一个SNP含2个P1) P2:一组下游探针 以1：1：1摩尔比混合称为位点探针 一组通用荧光探针 一组通用模板 以1：1摩尔比混合称为通用探针 设计不同位点和不同基因型探针连接产物的序列长短是已知的，并且有3n bp的差异。 在特定的基因型中，相应的检测探针与目的DNA完全互补，检测探针，下游探针和通用荧光探针分别和目的DNA以及通用模板杂交，