基因工程介绍一种新技术.docVIP

环介导等温扩增技术的研究 随着分子生物学技术的发展，以检测核酸为基础的分子生学技术如PCR[1]、再生式序列复制[2]以及链置换扩增技术[3，4]等广泛应用于医学和生物学等领域，在医学诊断和传染病病原体的检测方面发挥了重要的作用。由于核酸的分子生物学技术需要昂贵的仪器设备、操作程序复杂等缺点，大大限制了其作为快速诊断方法的使用。环介导等温扩增技术(LAMP)的问世[5]，解决了核酸诊断上出现的诸多难题，使其作为快速诊断成为可能。自LAMP技术建立多年以来，该技术已经广泛应用于对病毒，细菌，寄生虫以及环境中细菌等病原体的检测研究，取得了可喜的成就。本文就该技术的方法及研究进展综述如下。 1　环介导等温扩增技术的原理 环介导等温扩增技术是用一套四条特异性引物与靶基因的六个不同区域退火杂交，在具有链置换活性功能的DNA聚合酶的作用下实现等温条件下扩增DNA分子的核酸扩增新技术，具有高特异性、高效率、便捷等特点[5]。 2　引物设计 环介导等温扩增对引物特异性的要求更高，设计也更为复杂，环介导等温扩增需要两对引物即两条外部引物和两条内部引物，外部引物限定了扩增片段的大小范围，同时也为内部引物提供了模板。每条内部引物的两段DNA短片段通过TTTT序列连接[5]，也有研究结果认为在内部引物之间不加TTTT序列并不影响等温扩增，说明TTTT序列在串联内部引物上并不是必需的[6]。最近Naga