PCR与亲子刑事鉴定.ppt

PCR與親子刑事鑑定 Invented by K. Mullis in the 1980s (Nobel Prize) PCR: Purpose PCR allows you to amplify DNA Can amplify specific gene Can amplify up to a billion-fold! Part of the nucleotide sequence must be known PCR: Requirements DNA template (double stranded) primers (single stranded DNA) DNA polymerase nucleotides (A,C,G,T) thermocycler PCR: 3 steps Step 1: Separate the two strands of DNA template usually around 95 C Step 2: Cool to let the primers bind to the template strands usually around 40 to 60 C Step 3: DNA polymerase extends the primers two new complementary DNA strands synthesized usually around 72 C If each cycle takes about 5 minutes, how many copies can you make in an hour? Answer: 212 PCR: Applications Medical diagnostics viral RNA or DNA DNA fingerprinting Forensics (legal science) crimes paternity testing Evolutionary studies Human Genome Project PCR: Applications Infectious diseases Hepatitis virus (HBV, HCV) Human immunodeficiency virus (HIV) 前言 衛星DNA 圖１１－１ 重複序列DNA 表１１－１ 微衛星體 迷你衛星體 巨衛星體 圖１１－２ 圖１１－３ 圖１１－４ 單一基因座微衛星體之變數縱排重複序列 圖１１－５ 圖１１－６ 表１１－１ 限制片段長度多形性 圖１１－７ 圖１１－８ 圖１１－９ 聚合酶連鎖反應 圖１１－１０ 單一核苷酸多形性 粒線體DNA及Y染色體 若對偶基因為異時，稱該基因為異型合子(heterozygous)。有時變異會影響限制酶切割的部位，即原有的切割序列，因為變異而消失，或新的限制酶切割位置可能產生。因此基於序列上的不同而導致有不同的切割點，造成不同大小的限制酶切割片斷，即稱限制片段長度多形性RFLPs(restriction fragment length polymorphisms)。 限制酶片段長度多形性RFLP Method of RFLP Analysis 1.DNA Extraction 2.Digestion of DNA with a restriction endonuclease RFLP(續) 3.Agarose Gel Electrophoresis 4.Preparation of a Southern Blot 5.Hybridization with a Single-Locus Probe 6.Detection of RFLPs via autoradiography RFLP(續) 7.Re-probe southern blot with additional probes The set of Autorads so obtained is known as a DNA Profile. RFLP(續) PCR的極端靈敏度使交叉污染成為一個非常嚴重 的問題。極微小量的污染DNA，可能來自組織、 液體、細菌和實驗室設備。在某些條件下，法院 收集樣品時易造成交叉污染。污染的附加條帶將 會是可見且可能混淆、毀壞結果的。因此小心選 擇適當的操作條件及步驟、使用污染防治控制， 將使報告書中的交叉污染被識別出來。 可應用於： 在族群中基因型的變異是如何對疾病表現型造成差異、生態研究的應用、演化生物學、利用生物資訊學中資訊探索分析而發展的單一核苷酸多形性資料庫、藥物基因體學。 由粒線體DNA的資料顯示，所有不同的粒線體 DNA序列在171,500年前都歸屬於同一個原始 女性，這個拼