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现代药物分析选论 光学小分子设计及应用荧光素类染料：FITC（异硫氰酸荧光素）FAM（羟基荧光素）TET（丝氯荧光素） 罗丹明类：R101 RB200 TAMRA染料噻唑橙（TO） 恶唑橙（YO） 其他类：二苯乙烯、萘酰亚胺、香豆素类、吖啶芘类Springer、Chemical Reviews、alanta、Organic etters、dyes and pigments 体内药物分析 一、生物样品处理方法以及特点 【生物样品的特点】 样品珍贵，浓度低、量少；来源广泛、组成复杂、基质复杂；样品脆弱，容易失活；提纯步骤繁琐。 【生物样品处理方法】 1.不稳定样品的预处理（氧化 水解） 易被氧化药物：a.样品中加入抗氧剂（VitC+EDTA、半胱氨酸、2-巯基乙醇） b.将不稳定的药物转化为稳定的衍生物 易水解药物预处理：酯酶抑制剂常规方法：1）蛋白质沉淀：甲醇、乙腈同时采用超速离心机中性盐沉淀 （2）超滤法：操作条件温和，没有相态变化，能量消耗小，破坏有效成分可能小 需要血量少液液萃取：一次提取可取出大量杂质，根据不同的有机溶剂，可具有高选择性SPE（固相萃取技术）特点：基质效应小直接进样技术与柱切换技术在线处理和分离（样品处理柱和样品分析柱）衍生化 可以提高稳定性 检测特性等问题离子交换树脂：具有高选择性，但较麻烦适用于高极性，可电离的物质。其他（顶空GC、制备HPLC、微透析技术）方法特异性 2.标准曲线与线性范围 3.方法定量限 4.精密度与准确度；三个浓度点每个浓度点五份样 批内批间精密度低20%中高 15% 准确度不单独考察 5.提取回收率 6.介质效应（ME）； 用LC-MS测定样品时，由于内源性干扰物的存在，待测物在离子化过程中发生离子增强或离子抑制的作用.使测物响应值不稳定在85%--115%范围内可认为没有介质效应 措施： （1）选择合适样品前处理方法，LLE和SPE介质效应相对较少 （2）改变待测物的色谱分离条件，优化色谱条件使内源性物质与待测物分开 （3）采用小进样量 （4）利用液相色谱电解质效应，加入有机酸或碱，促进离子化 （5）使用较低流速，降低了待测成分与基质成分在离子源的竞争 （6）改用不同的离子源，考虑APCI和APPA，ESI对基质的敏感性更高 7.样品稳定性：室温放置8h时间、反复冻融、长期冰冻、进样器放置8—9h 三、代谢物研究的制备方法 体外方法：肝微粒体温孵法肝细胞温孵法基因重组酶温孵法肝组织切片法离体肝灌流法肠道菌群体外温孵法（甘草皂苷） 体内方法：胆汁 尿液 粪便 血液 其他（乳汁 肝匀浆等） 蛋白质组学是指在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识蛋白质组学从蛋白质的水平上，对蛋白质进行定量，动态、整体的研究、阐明生物体全部蛋白质，表达模式及功能模式特点蛋白质组学是动态的表现出多样性从mRNA表达水平并不能预测蛋白质表达 蛋白质动态修饰和加工并非必须来自基因序列 蛋白质组动态反映生物系统所处的状态 1）用于蛋白质荧光染色，如Sypro Ruby 和 RuBS 2) 用于蛋白质的荧光标记，如Cy2,Cy3和Cy5,可进行荧光双向差示凝胶电泳。 2运用质谱进行定量的蛋白质组分析技术： a稳定同位素代谢标记技术 b同位素亲和标签技术 主要是使用一种称为ICAT的化学试剂。其结构由三部分组成：第一 亲和标签（生物素），用来分离经标记后的多肽；第二 连接子，用来整合稳定的同位素；第三 活性基团，用来特异结合巯基。 三、二维电泳 第一相等电聚焦电泳分离 第二相按质量分离 固相PH梯度等电聚焦优点：克服了载体两性电解质阳极漂移，可精确设定PH 准备步骤：样品准备第一维 固相PH梯度第二维SDS-PAG染考马斯亮蓝图像分析，自动扫描 创新药物研发中的难点 杂质分类：无机杂质（试剂、配位体、催化剂、重金属、其他金属、无机盐、活性炭）有机杂质（起始原料、副产物、中间体、降解产物、试剂、配位体、催化剂、几何异构立体异构） 残留杂质 已鉴定杂质：已确证了结构特征的杂质 特定杂质：在质量标准中规定杂质并有自己限度标准的杂质已鉴定或未鉴定 潜在杂质：按照理论推测在生产或储藏过程中可能产生的杂质，实际生产中不一定存在 杂质谱：存在于药品中的杂质组成或杂质谱分析的基本途径： 挥发性杂质——残留溶剂——HS-GC ——其他 ——GC-MS 有机 ——RP-HPLC——不同检测器/梯度洗脱 ——互补方法——HPEC or HPTLC or HPGPC无机杂质 ——I